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無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細(xì)胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據(jù)樣品的粘稠程度，以及需要制備的目標(biāo)外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優(yōu)化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便達(dá)到更好的得率和操作體驗(yàn)。 樣品體積大于 30mL 時(shí)可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管，請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內(nèi)時(shí)吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進(jìn)一步提高特定外泌體的純度，可選用包被相應(yīng)抗體的磁珠進(jìn)行親和純化精制。買超濾濃縮管找益啟生物公司。虹口區(qū)離心濃縮管代理價(jià)

如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個(gè)目的蛋白的原因。有時(shí)蛋白會因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管（如原本選用30k，此時(shí)可以選擇10k）。 2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么： a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？ b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀問題的解釋。虹口區(qū)默克離心濃縮管報(bào)價(jià)益啟生物公司就帶您了解一下超濾濃縮管的特點(diǎn)。

用超濾對分子進(jìn)行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實(shí)際。事實(shí)上，膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質(zhì)。一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時(shí)比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留?；旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實(shí) 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應(yīng)該達(dá)到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間，則可達(dá)到比較理想的 分離。如果蛋白溶液較為稀釋，低壓下操作也有助于達(dá)到更好的效果。

濃度：當(dāng)需要截留的樣品濃度很低時(shí)，通量通常不受濃度影響。操作過 程中，隨著溶質(zhì)濃度的升高，增加的粘滯性和極化將導(dǎo)致通量降低。 溫度：粗體，作為獲得壓力、濃度一樣的詞條通常增加操作時(shí)的溫度可 以提高超濾效率。每增加 1℃蛋白擴(kuò)散率增加 3-3.5%，同時(shí)溶液粘度降低。 實(shí)踐中一般是以樣品和設(shè)備能耐受的比較高溫度來操作。 pH：改換溶液和 / 或 pH 常常改變分子結(jié)構(gòu)，蛋白尤其如此。在蛋白的 pI 值蛋白會沉淀，產(chǎn)生堵塞和得率損失。 污垢：溶液中除了目的分子造成的濃差極化，還有其它小顆粒和分子會 在膜上富集和沉淀，逐漸堆積在膜孔上或膜孔結(jié)構(gòu)中，形成結(jié)晶和沉淀。對于不同的需求我們選擇不同的超濾濃縮管系列。

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