緩沖溶液作用原理和pH值:當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時(shí),有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HAc與NaAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對(duì)酸的緩沖作用,是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當(dāng)向這種溶液中加入一定量的強(qiáng)酸時(shí),H 離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當(dāng)加入一定量強(qiáng)堿時(shí),溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。丁胺卡那霉素給藥說(shuō)明:配制靜脈用藥時(shí),每500mg加入氯化鈉注射液。MES buffer(0.1mol/L,pH4.0-9.0,無(wú)菌)
紅霉素溶液:紅霉素(Erythromycin)是由紅霉素鏈霉菌(Streptomyces erythreus)所產(chǎn)生的大環(huán)內(nèi)酯類克菌素,分子量為733.93。紅霉素對(duì)革蘭陽(yáng)性菌(如綠色鏈球菌、葡萄球菌、炭疽桿菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、梭狀芽孢桿菌等)具有很好的克菌性。另外,紅霉素對(duì)某些革蘭陰性菌也有一定的抑菌作用。紅霉素抑菌作用在于其與細(xì)菌的聚核糖體結(jié)合而克制肽鏈的延伸,對(duì)青霉素產(chǎn)生耐藥性的菌株,對(duì)紅霉素敏感。臨床上,紅霉素常用于耐青霉素的金葡菌傳染及對(duì)青霉素過(guò)敏的金葡菌傳染。Leagene Erythromycin solution主要用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷或其他用途。MES buffer(0.1mol/L,pH4.0-9.0,無(wú)菌)每種細(xì)胞對(duì)G418的敏感性不同,一般變動(dòng)在100ug/ml~1000ug/ml范圍。
主要試劑配制:(1)PBS:PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL,調(diào)pH7.2,高壓滅菌,4℃保存?zhèn)溆谩#?)RPIM-1640培養(yǎng)基:臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清,較后按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。(3)臺(tái)盼藍(lán)染液:稱取4g臺(tái)盼藍(lán),于研缽中用少量雙蒸水研磨,加雙蒸水至100mL,1500rpm離心15min,吸取上層液,即為4%水溶液。用前,用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍,即為2%臺(tái)盼藍(lán)染液。
氨芐青霉素是一種β-內(nèi)酰胺類,干擾肽聚糖的交聯(lián)從而克制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,屬于氨基青霉素類。氨芐青霉素時(shí)常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中,如用于配制含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基或LB平板等。氨芐青霉素溶液由氨芐青霉素溶于水組成,經(jīng)0.22μm過(guò)濾除菌,可以直接添加到培養(yǎng)基中。一般工作濃度為50~100μg/ml,其中嚴(yán)緊型質(zhì)粒常采用20μg/ml,松弛型質(zhì)粒常采用60μg/ml。使用方法:根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求操作,一般Amp在LB中終濃度為50~100μg/ml??梢园凑?/1000 LB體積加入100mg/ml Amp溶液,如100ml LB中加入100μl Amp 100mg/ml。注意事項(xiàng):1、盡注意無(wú)菌操作,避免污染。2、避免反復(fù)凍融。3、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。氨芐青霉素溶液配置:0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,小份分裝(1ml/管)后,置于-20℃保存。
溶故配制注意事項(xiàng):1.藥品要有較好的質(zhì)皿試劑分為優(yōu)級(jí)純(保證試劑,Guaranteed reagent,G.R.),分析試劑(Antalytical reagent, A. R.)化學(xué)純(Chemical pure,C. P.)和實(shí)驗(yàn)試劑(Laboratory reagent, L. R.)等等?;瘜W(xué)試劑,雜質(zhì)較多。只在個(gè)別情況下應(yīng)用。如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。2.藥品稱且要精確。3.配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水,比電閉值在50萬(wàn)歐姆以上,PH在5.5-7.0之間才可應(yīng)用,在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此頂要求。配制一般化9k用溶液只要求用雙燕蒸餾水或去離子水.4.配好后的溶液,應(yīng)立即除菌處理(如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)),以防雜菌生長(zhǎng)。利福平溶液怎么配制:加入40ml甲醇,振蕩充分混合溶解之后定容50ml,可以渦旋。MES buffer(0.1mol/L,pH4.0-9.0,無(wú)菌)
BMC原代分離步驟:抽取人的外周血于肝素抗凝管中,取足5mL新鮮血液。MES buffer(0.1mol/L,pH4.0-9.0,無(wú)菌)
淋巴細(xì)胞亞群及其功能:T淋巴細(xì)胞及其分類主要應(yīng)用抗T細(xì)胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面分化抗原將成熟T細(xì)胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群,T淋巴細(xì)胞的功能與表現(xiàn)型之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是相對(duì)的,其免疫活性可能受“微環(huán)境”的影響,并受MHC抗原的制約,許多研究證明,CD4+T細(xì)胞具有殺傷活性,介導(dǎo)Ι類抗原不相容時(shí)的靶細(xì)胞溶解。TU等研究表明,CD4+的細(xì)胞毒活性存在兩種完全不同的機(jī)理,并證明TH1和TH2的細(xì)胞毒活性不同。前者強(qiáng),后者弱或無(wú)活性。Dennert等發(fā)現(xiàn),克隆化的T淋巴細(xì)胞具有輔助,細(xì)胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)作用,這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細(xì)胞識(shí)別Ι類MHC抗原,其效應(yīng)的發(fā)揮也受Ι類抗原的制約;CD3+細(xì)胞識(shí)別Ι類MHC抗原,發(fā)揮免疫效應(yīng)也受其控制。MES buffer(0.1mol/L,pH4.0-9.0,無(wú)菌)