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不論做什么都是游刃有余,檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)自然也是如此,其中的操作技能是需要充分的文字了解與反復(fù)實(shí)踐的。試劑盒運(yùn)用的技能影響有多重要?的試劑,良好狀況的儀器,掃除各種影響因素的干擾和正確操作是保證檢測(cè)成果準(zhǔn)確牢靠的必要條件。加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍,難以清洗完全。顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不必guo期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必。加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。合理安排檢測(cè)量,檢測(cè)試劑盒避免反響板過(guò)多形成洗板等候時(shí)間長(zhǎng)。檢測(cè)試劑盒要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。Tris-MOPS-SDS電泳緩沖液(10×,pH8.3)
檢測(cè)試劑盒安全性:試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測(cè)試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。兔抗羊IgG(免疫血清)如果菌種為液體培養(yǎng)物,則可用無(wú)菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。
緩沖溶液的配制和應(yīng)用:為了配制一定pH的緩沖溶液,首先選定一個(gè)弱酸,它的pKaφ盡可能接近所需配制的緩沖溶液的pH值,然后計(jì)算酸與堿的濃度比,根據(jù)此濃度比便可配制所需緩沖溶液。以上主要以弱酸及其鹽組成的緩沖溶液為例說(shuō)明它的作用原理、pH計(jì)算和配制方法。對(duì)于弱堿及其鹽組成的緩沖溶液可采用相同的方法。緩沖溶液在物質(zhì)分離和成分分析等方面應(yīng)用普遍,如鑒定Mg2 離子時(shí),可用下面的反應(yīng):白色磷酸銨鎂沉淀溶于酸,故反應(yīng)需在堿性溶液中進(jìn)行,但堿性太強(qiáng),可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反應(yīng)的pH值需控制在一定范圍內(nèi),因此利用NH3·H2O和NH4Cl組成的緩沖溶液,保持溶液的pH值條件下,進(jìn)行上述反應(yīng)。
檢測(cè)試劑盒樣品收集: 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。DAPI是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。
檢測(cè)試劑盒標(biāo)本保存方法:標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響??鼓齽⒚敢种苿┘翱焖俜謩e血清的分別膠等均對(duì)測(cè)定有必定煩擾作用。標(biāo)本溶血。由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出很多具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為符號(hào)的測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,檢測(cè)試劑盒煩擾測(cè)定作用。為打敗上述煩擾作用,標(biāo)本搜集時(shí)有必要留意避免溶血。標(biāo)本保存不妥。 在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體,在間接法測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、乃至形成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)(如一日以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性削弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為打敗上述煩擾,測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮搜集;如不能立即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不行激烈振蕩。早期的化學(xué)試劑只是指“化學(xué)分析和化學(xué)試驗(yàn)中為測(cè)定物質(zhì)的組分或組成而使用的純粹化學(xué)藥品”。淀粉水解培養(yǎng)基
普遍使用液體試劑的基本原理,因此液體試劑在藥劑學(xué)上的應(yīng)用具有普遍意義。Tris-MOPS-SDS電泳緩沖液(10×,pH8.3)
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)在規(guī)定的貯存或使用條件下,定期地進(jìn)行待定特性量值的穩(wěn)定性檢驗(yàn)。穩(wěn)定性檢驗(yàn)的時(shí)間間隔可以按先密后疏的原則安排。在有效期間內(nèi)應(yīng)有多個(gè)時(shí)間間隔的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有多個(gè)待定特性量值時(shí),應(yīng)選擇那些易變的和有代表性的特性量值進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)。選擇不低于定值方法精密度和具有足夠靈敏度的測(cè)量方法進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn),并注意操作及實(shí)驗(yàn)條件的一致??疾旆€(wěn)定性所用樣品應(yīng)從分裝成小包裝單元的樣品中隨機(jī)抽取,抽取的樣品數(shù)對(duì)于總體樣品有足夠的代表性。Tris-MOPS-SDS電泳緩沖液(10×,pH8.3)