檸檬酸鈉(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)緩沖液(pH3.2)

科研實(shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng)：1. 取用少量的液體—使用膠頭滴管a. 應(yīng)在容器的正上方垂直滴入；膠頭滴管不要接觸容器壁【防止沾污試管或污染試劑】；b. 取液后的滴管，應(yīng)保持橡膠膠帽在上，不要平放或倒置【防止液體倒流，沾污試劑或腐蝕橡膠膠帽】；c. 用過的試管要立即用清水沖洗干凈；但滴瓶上的滴管不能用水沖洗，也不能交叉使用。2. 取用一定量的液體—使用量筒a. 當(dāng)向量筒中傾倒液體接近所需刻度時(shí)，停止傾倒，余下部分用膠頭滴管滴加藥液至所需刻度線；b. 讀數(shù)時(shí)量筒必須放平穩(wěn)，視線與量筒內(nèi)液體的凹液面的低處保持水平。檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。檸檬酸鈉(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)緩沖液(pH3.2)

檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)為什么要設(shè)置復(fù)孔？計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計(jì)算CV值，對實(shí)驗(yàn)的操作和檢測試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。加樣要準(zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，檢測試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。脫氫抗壞血酸(DHA)檢測試劑盒(菲咯啉比色法)PH電極的保護(hù)液，即 3mol/L的KCL溶液。

檢測試劑盒在處理和保存方面我們要考慮哪些事項(xiàng)呢？要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

從試劑瓶取用試劑，用左手持量筒（或試管），并用大姆指指示所需體積刻度處。右手持試劑瓶（注意：試劑標(biāo)簽應(yīng)向手心避免試劑沾污標(biāo)簽），慢慢將液體注入量筒到所指刻度。讀取刻度時(shí)，視線應(yīng)與液體凹面的低處保持水平。倒完后，應(yīng)將試劑瓶口在容器壁上靠一下，再將瓶子豎直，以免試劑流至瓶的外壁。如果是平頂塞子，取出后應(yīng)倒置桌上，如瓶塞頂不是扁平的，可用食指和中指（或中指和無名指）醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理將瓶塞夾?。ɑ蚍旁跐崈舻谋砻婷笊希?，切不可將它橫置桌上。取用試劑后應(yīng)立即蓋上原來的瓶塞，把試劑瓶放回原處，并使試劑標(biāo)簽朝外，應(yīng)根據(jù)所需用量取用試劑，不必多取，如不慎取出了過多的試劑，只能棄去，不得倒回或放回原瓶。以免沾污試劑。殺滅曲線的建立：根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適的濃度梯度。

檢測試劑盒樣品收集:血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒液試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，血脂高樣品。組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。用pH計(jì)測定配制好的鹽溶液的pH值，使其在6.4~7.0之間。普魯士藍(lán)染色液(中性紅法)

為保證溶質(zhì)盡可能全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中，應(yīng)用蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒并將每次洗滌后的溶液都注入到容量瓶中。檸檬酸鈉(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)緩沖液(pH3.2)

檢測試劑盒檢測成果分析辦法:試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。均勻OD值減去空白孔的OD值。制造規(guī)范曲線。以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，運(yùn)用作圖軟件得出一個(gè)適宜的計(jì)算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條*適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很挨近(+/-10%)。挑選擬合度的那條曲線。檸檬酸鈉(0.04mol/L):NaCl(0.02mol/L)緩沖液(pH3.2)