檢測試劑盒安全性:試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性,才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。SSC緩沖液(20×,pH7.0)
檢測試劑盒辦法的三大特色表現(xiàn):1.穩(wěn)定性好:包被的抗原的穩(wěn)定性可使檢測試劑盒的效期得到保證,早期以組成肽為包被抗原的檢測試劑盒效期只有3-4個月,選用基因工程抗原后效期很大程度延長了。2.基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達(dá),表達(dá)產(chǎn)品包括更多的抗原決定簇,可進(jìn)步檢測試劑盒的靈敏度,進(jìn)步檢出率。3.分子量大:組成肽選用化學(xué)辦法制備,由于工藝的限制,組成數(shù)量有限,只能達(dá)到數(shù)百個氨基酸。而使用基因工程制備的抗原,分子量更大。Tris-HCl緩沖液(1mol/L,pH6.8)一般植物細(xì)胞篩選濃度在 20~200μ g/ml,動物細(xì)胞篩選濃度 50~1000μ g/ml。
利福平助溶劑:性狀:白色或類白色粉末,無刺激氣味,易溶于水。主要成分:醫(yī)藥級藥物賦形劑。成分特性:賦形劑性質(zhì)穩(wěn)定,與主藥無配伍禁忌,不產(chǎn)生副作用,不影響療效,在常溫下不易變形、干裂、霉變、結(jié)塊、對人體無害、無生理作用,不與主藥產(chǎn)生拮抗作用,不影響主藥的含量測定等。作用機(jī)理:淺化學(xué)機(jī)理助溶,根據(jù)藥物分子結(jié)構(gòu)貼合相應(yīng)的親水基團(tuán),從而達(dá)到助溶目的。使用方法:利福平與助溶劑按7:3比例添加混合均勻,即得70%水溶利福平,混合后粉碎一遍效果更佳。(如需加工10-30%水溶利福平,用加工好的70%水溶劑福平加獸藥輔料稀釋即可。)標(biāo)準(zhǔn):企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),混合后水溶利福平基本無白點(diǎn),加入水中,溶解迅速至澄清, 溶解度4000PPM以上, 溶液中性弱堿, PH值7左右。注意事項(xiàng):加工成水溶性原料后,應(yīng)在干燥密封處保存,避免氧化!!!
BCA蛋白檢測試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測定的常見的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質(zhì)在堿性條件下,可以將二價Cu2+離子還原成一價Cu+離子。產(chǎn)生的一價Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結(jié)合,終生成紫色的復(fù)合物。該復(fù)合物在562nm處有很強(qiáng)的吸收峰。復(fù)合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線性關(guān)系。BCA蛋白檢測試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn):檢測的靈敏度高,檢測的蛋白質(zhì)濃度下限可達(dá)20μg/mL。線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內(nèi),呈接近的線性關(guān)系。兼容性良好,產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常普遍??蒲袑?shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng):取用少量的液體—使用膠頭滴管。
G418溶液是什么:G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結(jié)構(gòu)和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗(yàn)中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉(zhuǎn)座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細(xì)胞產(chǎn)生東西,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動物細(xì)胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以普遍應(yīng)用。溶液配制:G418溶液配制時,一般溶于水配成50mg/ml的原液,使用時再稀釋使用。在篩選菌類和藻類時,一般用5mg/l 的濃度或者更低。篩選哺乳動物細(xì)胞是大可400mg/l的濃度。固體試劑的取用:直接傾倒時瓶口必須緊挨試管口,試管45度,并且緩緩地倒。SSC緩沖液(20×,pH7.0)
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。SSC緩沖液(20×,pH7.0)
檢測試劑盒是經(jīng)過酶聯(lián)免疫吸附反響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來檢測特定物質(zhì)的檢測試劑盒,檢測試劑盒中會有不同濃度的規(guī)范樣品,在酶標(biāo)條中經(jīng)過固相的抗原或抗體,酶標(biāo)記的抗原或抗體,酶作用的底物反響可形成規(guī)范曲線,從而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)樣品的測定。檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)的基本原理究竟是什么呢?抗原或抗體可經(jīng)過共價鍵與酶銜接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表,可能是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性部分相互吸附,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)參加底物的色彩反響來判定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因而,能夠按底物顯色的程度顯示實(shí)驗(yàn)成果。SSC緩沖液(20×,pH7.0)