淋巴細(xì)胞亞群及其功能:T淋巴細(xì)胞及其分類主要應(yīng)用抗T細(xì)胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細(xì)胞表面分化抗原將成熟T細(xì)胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群,T淋巴細(xì)胞的功能與表現(xiàn)型之間的對應(yīng)關(guān)系是相對的,其免疫活性可能受“微環(huán)境”的影響,并受MHC抗原的制約,許多研究證明,CD4+T細(xì)胞具有殺傷活性,介導(dǎo)Ι類抗原不相容時的靶細(xì)胞溶解。TU等研究表明,CD4+的細(xì)胞毒活性存在兩種完全不同的機(jī)理,并證明TH1和TH2的細(xì)胞毒活性不同。前者強(qiáng),后者弱或無活性。Dennert等發(fā)現(xiàn),克隆化的T淋巴細(xì)胞具有輔助,細(xì)胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應(yīng)作用,這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細(xì)胞識別Ι類MHC抗原,其效應(yīng)的發(fā)揮也受Ι類抗原的制約;CD3+細(xì)胞識別Ι類MHC抗原,發(fā)揮免疫效應(yīng)也受其控制。實(shí)驗(yàn)室分裝時,固體只標(biāo)明試劑名稱,液體還須注名明濃度。核酸助沉劑(Glycogen,20mg/ml)
緩沖溶液作用原理和pH值:當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時,有阻礙溶液pH變化的作用,稱為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HAc與NaAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用,是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當(dāng)向這種溶液中加入一定量的強(qiáng)酸時,H 離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當(dāng)加入一定量強(qiáng)堿時,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化??偟鞍讬z測試劑盒(雙縮脲比吸光度比色法)檢測試劑盒變質(zhì)的原因:樣本因素。
單個核細(xì)胞分離液:反復(fù)著床失敗(recurrent implantation failure, RIF)已成為阻礙妊娠率進(jìn)一步提高的瓶頸問題。PBMCs (peripheral blood mononuclear cells)是指外周血單個核細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等,研究發(fā)現(xiàn)皮下注射丈夫或第三者外周血淋巴細(xì)胞主動免疫治好能提高IVF-ET反復(fù)著床失敗患者的妊娠率和活產(chǎn)率。在著床前宮腔灌注自體單個核細(xì)胞(PBMCs)(部分文獻(xiàn)寫為單核細(xì)胞)聯(lián)合HCG用于反復(fù)著床障礙的患者其具有操作簡單、一次完成、安全簡便、無反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。對于反復(fù)著床失敗患者在胚胎移植前給予宮腔灌注HCG處理過的PBMCs免疫治好能明顯提高患者的胚胎著床率和妊娠率。
檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)加樣要求:有此測定(如間接法檢測試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其中參加血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以確?;旌?。加酶結(jié)合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,在檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在檢測試劑盒中似不恰當(dāng)。按檢測試劑盒說明書的要求預(yù)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。檢測試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液使用pH計測量較正。從冰箱中取出的實(shí)驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。丁胺卡那霉素給藥說明:患者應(yīng)給予足夠的水分,以減少腎小管損害。
檢測試劑盒運(yùn)用注意事項(xiàng):在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反響時間到30min。反之,則減短反響時間。反響停止液為2M硫酸,防止接觸皮膚。不要運(yùn)用過了有用日期的檢測試劑盒;也不要運(yùn)用過了有用期的試劑盒中的任何試劑,摻雜運(yùn)用過了有用期的檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交流運(yùn)用不同批號試劑盒中的試劑。試劑盒具有的幾個優(yōu)點(diǎn):吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;靈敏、特異的抗體。檢測試劑盒準(zhǔn)確度是測定值與實(shí)在值挨近的程度。堿性磷酸酶(ALP)檢測試劑盒(PNP微板法)
淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。核酸助沉劑(Glycogen,20mg/ml)
怎樣減少檢測試劑盒誤差?檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。洗滌徹底,如若洗板不徹底,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。核酸助沉劑(Glycogen,20mg/ml)