線粒體染色液(Altmann法)

pH緩沖溶液的類型與作用：pH緩沖溶液包括兩大類：標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液和普通緩沖溶液。標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液主要用在酸度計測量溶液pH值時的儀器校正和定位，要求數(shù)值準(zhǔn)確、精確。因此對試劑純度、濃度準(zhǔn)確性、溫度等都有嚴(yán)格要求，這類緩沖溶液有專門的化學(xué)試劑商品，可以購買配制，也可以用優(yōu)級純試劑按資料的配比配制。普通緩沖溶液主要用于化學(xué)分析和儀器分析中要控制一定pH值的測定過程中。幾乎所有的EDTA絡(luò)合滴定都必須在一定的pH范圍內(nèi)進(jìn)行，因此，需要加入pH緩沖溶液，例如，測定鉛、鋅用到HAc緩沖溶液，測定鈣、鎂、鋅用到氨緩沖溶液。又如，氧化還原滴定中，碘量法測銅要用到NH4HF2，碘量法測砷、銻要加NaHCO3。滴劑是指藥物與適宜的溶劑或分散介質(zhì)制成的滴至動物的頭、背等部位局部給藥的液體試劑。線粒體染色液(Altmann法)

為了避免溶液灑出，同時不要讓溶液在刻度線上面沿瓶壁流下，用玻璃棒引流。為保證溶質(zhì)盡可能全部轉(zhuǎn)移到容量瓶中，應(yīng)該用蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒二、三次，并將每次洗滌后的溶液都注入到容量瓶中。輕輕振蕩容量瓶，使溶液充分混合。(用玻璃棒引流)定容：加水到接近刻度2-3厘米時，改用膠頭滴管加蒸餾水到刻度。定容時要注意溶液凹液面的低處和刻度線相切，眼睛視線與刻度線呈水平，不能俯視或仰視，否則都會造成誤差。 搖勻：定容后的溶液濃度不均勻，要把容量瓶瓶塞塞緊，用食指頂住瓶塞，用另一只手的手指托住瓶底，把容量瓶倒轉(zhuǎn)和搖動多次，使溶液混合均勻。二苯卡巴腙指示劑（0.1%）檢測試劑盒要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性。

主要試劑配制：（1）PBS：PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL，調(diào)pH7.2，高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩＃?）RPIM-1640培養(yǎng)基：臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清，較后按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）臺盼藍(lán)染液：稱取4g臺盼藍(lán)，于研缽中用少量雙蒸水研磨，加雙蒸水至100mL，1500rpm離心15min，吸取上層液，即為4%水溶液。用前，用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍，即為2%臺盼藍(lán)染液。

緩沖溶液的緩沖能力：在緩沖溶液中加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，其溶液pH值變化不大，但若加入酸，堿的量多時，緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說明它的緩沖能力是有一定限度的。緩沖溶液的緩沖能力與組成緩沖溶液的組分濃度有關(guān)。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· 　 L-1NaAc組成的緩沖溶液，比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的緩沖溶液緩沖能力大。關(guān)于這一點(diǎn)通過計算便可證實(shí)。但緩沖溶液組分的濃度不能太大，否則，不能忽視離子間的作用。組成緩沖溶液的兩組分的比值不為1∶1時，緩沖作用減小，緩沖能力降低，當(dāng)c（鹽）/c（酸）為1∶1時△pH較小，緩沖能力大。不論對于酸或堿都有較大的緩沖作用。緩沖溶液的pH值可用下式計算：此時緩沖能力大。緩沖組分的比值離1∶1愈遠(yuǎn)，緩沖能力愈小，甚至不能起緩沖作用。對于任何緩沖體系，存在有效緩沖范圍，這個范圍大致在pKaφ（或pKbφ）兩側(cè)各一個pH單位之內(nèi)。BMC原代分離步驟：較上面是血漿，血漿層和淋巴細(xì)胞分離液之間是淋巴細(xì)胞層呈白膜狀。

弱酸-弱堿型緩沖溶液的構(gòu)成與配制。這類緩沖溶液的組成為：弱酸+弱酸鹽（即共軛堿）、弱堿+弱堿鹽（即共軛酸）。常見的實(shí)例有：HAc-NaAc、HAc-NH4Ac（微酸性）、NH4Cl-NH3.這類緩沖溶液的實(shí)驗(yàn)室配制方法一般是根據(jù)溶液組成和濃度要求，直接稱取或量取弱酸、弱酸鹽溶液或弱堿、弱堿鹽溶液來配制。其實(shí)，這類緩沖溶液還可以用強(qiáng)酸與弱堿、強(qiáng)堿與酸來配制，歸納起來，應(yīng)該有三種配制方法：（1）弱酸+弱酸鹽，弱堿+弱堿鹽例如，HAc-NaAc、NH4Cl-NH3（2）弱酸（過量）+強(qiáng)堿（適量），弱堿（過量）+強(qiáng)酸（適量）例如，HAc（過量）-NaOH（適量）、NH3（過量）-HCl（適量）。這類緩沖溶液需要的共軛堿（NaAc）或共軛酸（NH4Cl）是通過反應(yīng)后產(chǎn)生的。（3）弱酸鹽（過量）+強(qiáng)酸（不足量）或弱堿鹽（過量）+強(qiáng)堿（不足量）例如，NaAc（過量）+HCl（適量），NH4Cl（過量）+NaOH（適量）緩沖溶液需要的弱酸（HAc）或弱堿（NH3）則通過反應(yīng)后產(chǎn)生。檢測試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為根底。多組分酸堿指示劑(硼酸-甲基紅-溴甲酚綠)

PBS是磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline)一般作為溶劑。線粒體染色液(Altmann法)

檢測試劑盒檢測成果分析辦法:試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。均勻OD值減去空白孔的OD值。制造規(guī)范曲線。以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，運(yùn)用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條*適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很挨近(+/-10%)。挑選擬合度的那條曲線。線粒體染色液(Altmann法)