檢測試劑盒的要點有哪些?在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸騰和污染,試劑避免受到微生物的污染,由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)過錯的成果。當心汲取試劑并嚴格遵守給定的孵育時刻和溫度。請注意在汲取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與后一個孔加樣之間的時刻距離假如太大,將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時刻,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。而且,洗滌不充分將影響實驗成果。檢測試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,詳細以標簽上的標明為準。冬季檢測試劑盒的正確保存:血清標本如是以無菌操作別離。溶出介質(zhì)(EP,pH2.2)
緩沖溶液的計算分為兩大類:(1)已知共軛酸堿的濃度或質(zhì)量,計算pH值。(2)已知pH值,計算配制時要滿足的濃度和質(zhì)量配制緩沖溶液時,有多種組合的方法,常見的有以下幾種(1)兩種溶液混合:如,NH3+NH4Cl溶液,NaOH溶液 +NH4Cl溶液,NH3+HCl溶液。(2)固體試劑+溶液:如,NH3+NH4Cl固體,NaOH固體 +NH4Cl溶液,HAc+NaAc固體。(3)兩種固體試劑溶解混合:如,NaOH固體 +NH4Cl固體,Na2CO3固體+NaHCO3固體。由此可見,緩沖溶液的計算類型是很豐富的。實驗中的配制一般是按共軛酸堿的量來稱取或量取試劑后,再溶解混合到指定體積。但分析化學(xué)學(xué)習(xí)中的計算類型則可以演繹出十幾種計算情況。標準蛋白質(zhì)溶液(BSA,50mg/ml)氨芐青霉素溶液配置:0.22μm濾膜過濾除菌,小份分裝(1ml/管)后,置于-20℃保存。
甘油三酯檢測試劑盒的操作注意事項:試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存;實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì);不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用;使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器;使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測試劑盒里的各種成份及樣品;洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
冬季檢測試劑盒的正確保存:血清標本如是以無菌操作別離,則可以在2~8℃下保存一周,檢測試劑盒如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應(yīng)在-70℃以下。冰凍保存的血清標本須留心避免因停電等構(gòu)成的重復(fù)凍融。檢測試劑盒標本的重復(fù)凍融所發(fā)作的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)作損壞效果,然后引起假陰性效果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)留心,不要進行劇烈振動,重復(fù)倒置混勻即可。標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉積后取上清檢測。試驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的試驗確診方法。因為其試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡便,效果判別較客觀等要素,已普遍應(yīng)用在免疫學(xué)查驗的各領(lǐng)域中。檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體檢測。液體試劑分散度大,吸收快。
怎樣減少檢測試劑盒誤差?嚴控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,酶失活;反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。注意檢測試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。評估試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。磷酸鹽緩沖液(pH7.4)
檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。溶出介質(zhì)(EP,pH2.2)
檢測方法的三大特點:穩(wěn)定性好:包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到確保,早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4個月,選用基因工程抗原后效期很大程度延長了。基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達,表達產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇,可提高試劑盒的靈敏度,提高檢出率。分子量大:合成肽選用化學(xué)辦法制備,因為工藝的限制,合成數(shù)量有限,只能達到數(shù)百個氨基酸。而使用基因工程制備的抗原,分子量更大。用EDTA2K離心搜集在真空血液搜集管中的血液,5,000×g,15分鐘,4℃,分離血漿樣品,然后儲存在零下80℃直到使用。溶出介質(zhì)(EP,pH2.2)