免疫染色封閉液

液體培養(yǎng)基接種向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí)，其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進(jìn)液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動(dòng)液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時(shí)，可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個(gè)接種過程都要求無菌操作。PH電極的保護(hù)液為了測(cè)量時(shí)會(huì)更加精確。免疫染色封閉液

檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理:檢測(cè)試劑盒為雙抗體夾心法檢測(cè)抗原RBD蛋白，酶標(biāo)板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物，檢測(cè)時(shí)酶標(biāo)板孔加入待檢樣品或標(biāo)準(zhǔn)品（哺乳動(dòng)物重組表達(dá)RBD蛋白），再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應(yīng)后加入鏈霉親和素HRP，后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白，TMB底物液在HRP催化下顯色，加入終止液終止顯色后，在酶標(biāo)儀OD450/OD630讀取吸光值，吸光值大小與待檢測(cè)樣品中RBD蛋白濃度呈正相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度/吸光值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算出待檢樣品中RBD蛋白含量。Ficoll 400裂解液(50% w/v)pH緩沖溶液有何用途：檢測(cè)pH電極的性能。

主要試劑配制：（1）PBS：PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL，調(diào)pH7.2，高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。?）RPIM-1640培養(yǎng)基：臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清，較后按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）臺(tái)盼藍(lán)染液：稱取4g臺(tái)盼藍(lán)，于研缽中用少量雙蒸水研磨，加雙蒸水至100mL，1500rpm離心15min，吸取上層液，即為4%水溶液。用前，用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍，即為2%臺(tái)盼藍(lán)染液。

檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。所有液體組分使用前充分搖勻。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻檢測(cè)試劑盒里的各種成份及樣品。實(shí)驗(yàn)室分裝時(shí)，固體只標(biāo)明試劑名稱，液體還須注名明濃度。

檢測(cè)試劑盒用途：運(yùn)用定性夾心免疫檢測(cè)技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是我國型HEV毒株主要氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段，別離來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品參與孔中并孵育，如果其間存在HEV IgM抗體，這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除掉其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后參與羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除掉未結(jié)合的酶結(jié)合物，參與TMB底物溶液，在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)作酶-底物反響，只要那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所構(gòu)成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)作顏色改變，參與硫酸溶液停止酶和底物間的反響，并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體檢測(cè)試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性?？蒲袑?shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng)：取用一定量的液體—使用量筒。甲基橙-酸性靛藍(lán)指示劑

ELISA檢測(cè)試劑盒是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎病毒抗體ELISA檢測(cè)。免疫染色封閉液

用pH計(jì)測(cè)定配制好的鹽溶液的pH值，使其在6.4~7.0之間。一般鹽霧標(biāo)準(zhǔn)中要求試驗(yàn)過程中的鹽霧收集液pH值在6.5~7.2之間。當(dāng)pH值不在上述范圍時(shí)，應(yīng)用氫氧化鈉（NaOH）或者冰乙酸（CH3COOH）進(jìn)行調(diào)節(jié)。氫氧化鈉可以使pH值升高，冰乙酸使pH值降低。通常只需要加入少量的即可調(diào)節(jié)pH值。在氯化鈉溶液中加入少量冰乙酸，攪拌均勻，并用pH計(jì)測(cè)量溶液的pH值，直至其為3.0-3.1之間，試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.1-3.3之間。配制好乙酸鹽霧溶液后，加入氯化銅，其濃度為0.26g/L±0.02g/L（即0.205g/L±0.015g/L無水氯化銅）。調(diào)節(jié)溶液的pH值，直至其為3.0-3.1之間，試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.0-3.1之間。免疫染色封閉液