磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

檢測(cè)方法的三大特點(diǎn)：穩(wěn)定性好：包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到確保，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4個(gè)月，選用基因工程抗原后效期很大程度延長(zhǎng)了。基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。分子量大：合成肽選用化學(xué)辦法制備，因?yàn)楣に嚨南拗?，合成?shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸。而使用基因工程制備的抗原，分子量更大。用EDTA2K離心搜集在真空血液搜集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用。一般植物細(xì)胞篩選濃度在 20～200μ g/ml，動(dòng)物細(xì)胞篩選濃度 50～1000μ g/ml。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

科研實(shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng)：1. 取用少量的液體—使用膠頭滴管a. 應(yīng)在容器的正上方垂直滴入；膠頭滴管不要接觸容器壁【防止沾污試管或污染試劑】；b. 取液后的滴管，應(yīng)保持橡膠膠帽在上，不要平放或倒置【防止液體倒流，沾污試劑或腐蝕橡膠膠帽】；c. 用過(guò)的試管要立即用清水沖洗干凈；但滴瓶上的滴管不能用水沖洗，也不能交叉使用。2. 取用一定量的液體—使用量筒a. 當(dāng)向量筒中傾倒液體接近所需刻度時(shí)，停止傾倒，余下部分用膠頭滴管滴加藥液至所需刻度線(xiàn)；b. 讀數(shù)時(shí)量筒必須放平穩(wěn)，視線(xiàn)與量筒內(nèi)液體的凹液面的低處保持水平。堿性凝膠加樣緩沖液(6×)檢測(cè)試劑盒汲取液體時(shí)速度不易太快，以免發(fā)生氣泡。

檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分析：洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干（報(bào)紙就免了吧?。Ｏ匆翰粔驎r(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存（洗液先用現(xiàn)配不費(fèi)多少事的）。底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配（同前，避光?。?。檢測(cè)前，要打開(kāi)酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸（終止液為硫酸，小心毀容）。待檢樣品要澄清，否則會(huì)影響結(jié)果。溫浴時(shí)間應(yīng)遵守檢測(cè)試劑盒規(guī)定。應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧：濃洗刷液或許會(huì)有結(jié)晶分出，檢測(cè)試劑盒稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響效果。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并經(jīng)常校正其正確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多，舉薦運(yùn)用排加樣。封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免交叉污染。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)效果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。液體培養(yǎng)基接種向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí)，其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同。

使用方法：1， 固定細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過(guò)固定后，適當(dāng)洗滌除去固定劑。如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，可先進(jìn)行免疫熒光染色，染完畢后再進(jìn)行染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行染色。 2， 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積 3 倍的染色液，混勻。 3， 室溫染色 5-10 分鐘。 4， 吸除染色液，生理鹽水洗滌 2-3 次，每次 3-5 分鐘。 5， 置于熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng) 360-400nm。 溶液注意事項(xiàng)： dapi 被普遍認(rèn)為具有致性，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免交叉污染。 本產(chǎn)品需避光，并盡量避免反復(fù)凍融。熒光染料都存在淬滅問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。室溫條件，水平轉(zhuǎn)子離心400g，離心30-40min，可見(jiàn)細(xì)胞分層。堿性凝膠加樣緩沖液(6×)

稀釋過(guò)的血液樣本小心鋪到Ficoll分離液上面。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）

說(shuō)明?檢測(cè)試劑盒的具體規(guī)則:汲取液體時(shí)要選用量程和需要量挨近的微量加樣器吸，削減誤差。液體全部參加酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充沛混合均勻，也使其得到充沛的反響。孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，避免水分蒸發(fā)，以防曲線(xiàn)不成線(xiàn)性。實(shí)驗(yàn)前的30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，檢測(cè)試劑盒使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只需取出所需量。因?yàn)榈孜镲@色劑對(duì)光及其靈敏，因而要避光保存。手藝洗板時(shí)每次參加洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，避免穿插污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。磷酸鹽緩沖液（pH5.8）