檢測試劑盒實驗經(jīng)驗分析:洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干(報紙就免了吧?。?。洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存(洗液先用現(xiàn)配不費多少事的)。底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配(同前,避光?。?。檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸(終止液為硫酸,小心毀容)。待檢樣品要澄清,否則會影響結(jié)果。溫浴時間應(yīng)遵守檢測試劑盒規(guī)定。應(yīng)盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。檢測試劑盒汲取液體時要選用量程和需求量接近的微量加樣器吸,減少差錯。TTC染色液(0.5%)
如何正確保存和使用pH緩沖溶液:緩沖溶液配制后,應(yīng)裝在玻璃瓶或聚乙烯瓶中(堿性pH緩沖液,如,pH=9.18、pH=10.01、pH=12.46等,應(yīng)裝在聚乙烯瓶中)瓶蓋嚴(yán)密蓋緊,在冰箱中低溫(5~10℃)保存,一般可使用六個月左右,如發(fā)現(xiàn)有混頻器濁,發(fā)霉或沉淀現(xiàn)象,不能繼續(xù)使用。使用時,應(yīng)準(zhǔn)備幾個50mL的聚乙烯小瓶,將大瓶中的組沖溶液倒入小瓶中,并在環(huán)境溫度下放置1~2個小時,等溫度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中,以免污染,瓶中的緩沖溶液在>10℃的環(huán)境條件下可以使用2~3天,一般pH=7.00、pH=6.86、pH=14.00三種溶液使用時間可以長一些,pH=9.18和pH=10.01溶液由于吸收空氣中的二氧化碳,其pH值比較容易變化。常規(guī)考馬斯亮藍染色洗脫液殺滅曲線的建立:按照20-25%的細胞密度將未轉(zhuǎn)化的細胞鋪在合適的培養(yǎng)板上。
檢測試劑盒實驗經(jīng)驗分析:要保證移液的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%??捎盟吞炱?>電子天平進行校正。校正方法自己放狗吧,但有專業(yè)人員進行矯正。要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排各一支(靠,基本是廢話了)。吸取不同的液體后,要更換頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(應(yīng)該是特別是?。R趯嶒炃?小時將檢測試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定(這個是容易忽視的?。?。實驗時,要使底物避光保存。用吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
檢測方法的三大特點:穩(wěn)定性好:包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到確保,早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4個月,選用基因工程抗原后效期很大程度延長了?;蚬こ炭乖瓕⑻禺愋钥乖瓫Q定簇基因融合表達,表達產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇,可提高試劑盒的靈敏度,提高檢出率。分子量大:合成肽選用化學(xué)辦法制備,因為工藝的限制,合成數(shù)量有限,只能達到數(shù)百個氨基酸。而使用基因工程制備的抗原,分子量更大。用EDTA2K離心搜集在真空血液搜集管中的血液,5,000×g,15分鐘,4℃,分離血漿樣品,然后儲存在零下80℃直到使用。常用熒光顯微鏡觀測,可以透過完整的細胞膜。
G418又稱遺傳霉素,新霉素,對細菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細胞具有氨基苷類毒性,對真核細胞進行篩選。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結(jié)構(gòu)和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉(zhuǎn)座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細胞產(chǎn)生東西,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進真核細胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以普遍應(yīng)用。丁胺卡那霉素給藥說明:長期用藥可能導(dǎo)致耐藥菌過度生長。Mayer蘇木素染色液
PBS:PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL,調(diào)pH7.2,高壓滅菌,4℃保存?zhèn)溆?。TTC染色液(0.5%)
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的正確使用:不確定度表示被測量值的分散性,不同的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)其特性的不確定度也不同。在選擇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時應(yīng)當(dāng)考慮其對考慮其對預(yù)期分析結(jié)果要求的不確定度水平的影響。除生產(chǎn)者確定的不確定度外,標(biāo)準(zhǔn)樣品的不同處理過程也會影響分析結(jié)果的不確定度,例如標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與分析樣品基體之間有差異時,或使用與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法不同的分析方法時,可能其不確定度與生產(chǎn)者提供的會有差異。使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時,其不確定度并不是越小越好,還應(yīng)當(dāng)考慮供應(yīng)狀況、成本、預(yù)期使用的化學(xué)適用性和物理適用性。TTC染色液(0.5%)