氨-氯化銨緩沖液(pH8.0)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-10-30

弱酸-弱堿型緩沖溶液(即共軛酸堿緩沖溶液)、酸式鹽緩沖溶液、強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液。在一些特殊情況下也使用混合體系的緩沖溶液(兩種pKa相近的共軛酸堿緩沖溶液混合而成)。大家比較熟悉的是共軛酸堿緩沖溶液,例如,HAc-NaAc、HF-NH4F、NH3-NH4Cl。其實(shí),酸式鹽也可作為緩沖溶液,因?yàn)樗崾禁}的pH值大多是恒定的,隨其濃度增減的變化不大,例如,NaHCO3溶液在1.0M至0.01M之間,其pH值幾乎都在8左右(理論值為8.3),同樣可以抵抗溶液中產(chǎn)生的少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿(或外加),保持溶液的pH值恒定或變化微小。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿溶液也能緩沖滴定過程中產(chǎn)生的少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,保持溶液的pH值變化很小,故強(qiáng)酸強(qiáng)堿也可作為廣義的pH緩沖溶液(以前的分析化學(xué)教材就是這樣分的),例如,EDTA絡(luò)合滴定鉍,需另外加入一定量的0.1mol/L硝酸溶液,就是為了增強(qiáng)溶液對滴定中產(chǎn)生的H+的緩沖作用。液體試劑分散度大,吸收快。氨-氯化銨緩沖液(pH8.0)

氨-氯化銨緩沖液(pH8.0),液體試劑

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選:1、轉(zhuǎn)染48 h后,用含適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)的殺傷效果較好。但細(xì)胞過于稠密,其效率會降低,較好將細(xì)胞稀釋至豐度低于25%。2、每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。3、篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間(取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果)。4、挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。5、后續(xù)更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。改良油紅O染色液丁胺卡那霉素給藥說明:不可直接靜脈推注,以免產(chǎn)生神經(jīng)肌肉阻滯和呼吸克制作用。

氨-氯化銨緩沖液(pH8.0),液體試劑

淋巴細(xì)胞分離液:淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液、Percoll淋巴細(xì)胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。分離原理:外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。淋巴細(xì)胞分離液Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque )是世界范圍內(nèi)用于體外研究分離人淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)。

用pH計(jì)測定配制好的鹽溶液的pH值,使其在6.4~7.0之間。一般鹽霧標(biāo)準(zhǔn)中要求試驗(yàn)過程中的鹽霧收集液pH值在6.5~7.2之間。當(dāng)pH值不在上述范圍時(shí),應(yīng)用氫氧化鈉(NaOH)或者冰乙酸(CH3COOH)進(jìn)行調(diào)節(jié)。氫氧化鈉可以使pH值升高,冰乙酸使pH值降低。通常只需要加入少量的即可調(diào)節(jié)pH值。在氯化鈉溶液中加入少量冰乙酸,攪拌均勻,并用pH計(jì)測量溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.1-3.3之間。配制好乙酸鹽霧溶液后,加入氯化銅,其濃度為0.26g/L±0.02g/L(即0.205g/L±0.015g/L無水氯化銅)。調(diào)節(jié)溶液的pH值,直至其為3.0-3.1之間,試驗(yàn)過程中收集液的PH值應(yīng)在3.0-3.1之間。室溫條件,水平轉(zhuǎn)子離心400g,離心30-40min,可見細(xì)胞分層。

氨-氯化銨緩沖液(pH8.0),液體試劑

氨芐青霉素為白色晶體或粉末,分子式是C16H19N3O4S,分子量為349.41。溶于稀酸和稀堿,微溶于水和甲醇,幾乎不溶于氯仿、96%乙醇、、乙酸乙酯和固定油。無臭,味苦。抗革蘭氏陽性及陰性菌,用于分子生物學(xué)和組織培養(yǎng)(防止微生物污染和抗性篩選)。氨芐青霉素時(shí)常被用于分子生物學(xué)上,作為細(xì)菌(如大腸桿菌)吸收基因(如質(zhì)粒)的測試。測試會將一組基因,連同已編碼抗氨芐青霉素的基因插入細(xì)菌中。該細(xì)菌會被放于充滿氨芐青霉素的環(huán)境下培育,直至成功制造卞所需的基因。pH緩沖溶液有何用途:用以檢定pH計(jì)的準(zhǔn)確性。氨-氯化銨緩沖液(pH8.0)

青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。氨-氯化銨緩沖液(pH8.0)

檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)有哪些?正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。在實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。氨-氯化銨緩沖液(pH8.0)

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