怎樣減少檢測(cè)試劑盒誤差?嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),酶失活;反應(yīng)時(shí)間過(guò)短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。注意檢測(cè)試劑盒保存期,過(guò)保存期的試劑不能使用。評(píng)估試劑的實(shí)用性,試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過(guò)短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過(guò)少,易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果。丁胺卡那霉素給藥說(shuō)明:配制靜脈用藥時(shí),每500mg加入氯化鈉注射液。卵培養(yǎng)基
試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧:濃洗刷液或許會(huì)有結(jié)晶分出,檢測(cè)試劑盒稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響效果。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,核算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并經(jīng)常校正其正確性,以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)目多,舉薦運(yùn)用排加樣。封板膜只限一次性運(yùn)用,以避免交叉污染。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)效果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。卵培養(yǎng)基注意事項(xiàng):避免反復(fù)凍融。
檢測(cè)試劑盒運(yùn)用注意事項(xiàng):在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時(shí)間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反響時(shí)間到30min。反之,則減短反響時(shí)間。反響停止液為2M硫酸,防止接觸皮膚。不要運(yùn)用過(guò)了有用日期的檢測(cè)試劑盒;也不要運(yùn)用過(guò)了有用期的試劑盒中的任何試劑,摻雜運(yùn)用過(guò)了有用期的檢測(cè)試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交流運(yùn)用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。試劑盒具有的幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;靈敏、特異的抗體。
如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢?第一種方法是采用線性稀釋?zhuān)话銇?lái)講,抗原和捕獲抗體、檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng),樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合,而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多,如果不斷稀釋樣品,非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少,測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí),無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí),稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少,測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。第二種方法是摻入回收率實(shí)驗(yàn),將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中,摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%,才符合標(biāo)準(zhǔn)。科研實(shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng):用過(guò)的試管要立即用清水沖洗干凈。
鹽酸強(qiáng)力霉素溶液科研實(shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng):1. 固體試劑的取用:取用固體藥品時(shí)藥匙必須是干凈的.一支藥匙不能同時(shí)取用兩種或兩種以上的試劑.藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈,以備下次使用.藥匙的兩端為大小兩匙,取固體量較多時(shí)用大匙,較少時(shí)用小匙。2. 取用不定量(較多)液體——直接傾倒a. 瓶塞必須倒放在桌面上【防止藥品腐蝕實(shí)驗(yàn)臺(tái)或污染藥品】;b. 直接傾倒時(shí)瓶口必須緊挨試管口,試管45度,并且緩緩地倒【防止藥液損失】;c. 貼標(biāo)簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標(biāo)簽】;d. 倒完液體后,要立即蓋緊瓶塞,并把瓶子放回原處,標(biāo)簽朝向外面【防止藥品潮解、變質(zhì)】。倒入試管里溶液的量,一般不超過(guò)其容積的1/3。卵培養(yǎng)基
校準(zhǔn)液標(biāo)示值往往是按其基質(zhì)偏差修正的,所以標(biāo)示值并非實(shí)際值。卵培養(yǎng)基
挑選檢測(cè)試劑盒的方法:靈敏度。反應(yīng)的是檢測(cè)試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的才行,用戶(hù)可根據(jù)自個(gè)樣本中待檢目標(biāo)的量挑選合適的檢測(cè)試劑盒,比如待檢目標(biāo)量很低,一般的檢測(cè)試劑盒不能滿(mǎn)足要求,可挑選高敏的檢測(cè)試劑盒。重復(fù)性:科學(xué)試驗(yàn)考究重復(fù)性,通常檢測(cè)試劑盒,其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)當(dāng)控制在15%以?xún)?nèi)。特異性:檢測(cè)試劑盒的特異性與檢測(cè)試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對(duì)有關(guān),若抗體對(duì)中為多抗,另一個(gè)有必要為單抗,推薦運(yùn)用雙單抗。簡(jiǎn)便性:在確保高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,試驗(yàn)時(shí)間短,操作便捷,這也可以作為挑選檢測(cè)試劑盒的一個(gè)判斷。卵培養(yǎng)基
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