紹興細胞生物學膜片鉗技術應用

膜片鉗技術的基本原理和方法：膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值，以研究動作電位產生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律，而無法反映單個通道的活動特點，同時通過細胞內微電極引導記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術的優(yōu)勢是可利用負反饋電子線路，將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細胞膜的電位固定在一定水平上，對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性：光能應用于懸浮細胞的紀錄。紹興細胞生物學膜片鉗技術應用

膜片鉗的數(shù)據如何處理：1）細胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細胞骨架及有關代謝過程是完整的,故對細胞結構和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細胞骨架可能有所變化。另外這種膜片不能控制細胞內成分。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2）內面向外式膜片( inside outpatch)細胞內外和電極內的溶液均可調控,既能較容易地改變細胞內的離子或物質濃度,又能把酶等直接加于膜的內側面,適宜研究胞內物質對通道活動的影響。紹興細胞生物學膜片鉗技術應用膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性：細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作。

膜片鉗技術及其應用：它是作者在\"膜片鉗技術及其應用\"領域所進行的研究工作的總結，同時也吸取了國際上的先進技術和新近的研究成果。內容包括:細胞電生理與膜片鉗技術，膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術概要，膜片鉗放大器原理與低噪聲設計，單通道和全細胞電流記錄技術，數(shù)據采集和分析，細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術和安培測量技術，細胞內鈣離子濃度的測量及鈣庫特性，腦切片膜片鉗技術，心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。

膜片鉗的數(shù)據如何處理：全細胞式膜片方式使細胞內與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實現(xiàn)。電極管內與細胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細胞內液的成分。細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。如果有目的地將膜電位鉗制在某一程度,可做到選擇性抑制某些通道的活性而只記錄某種通道電流的總和,并可在同一細胞上觀察幾種不同通道的情況。通過改變內部介質,如改變電極液成分,或在電極液中加入所需藥物,通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細胞記錄中廣泛應用。膜片鉗使用操作流程及注意事項：禁止私拉電線，如有實驗要求可與老師及時溝通。

一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程：膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興奮細胞如神經元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。傳統(tǒng)膜片鉗技術對實驗人員的技術要求非常高，一般地，實驗人員需要經過嚴格的長期的訓練，才能準確且快速的操作。膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性：大部分的紀錄對象為化細胞，而對于需要貼壁生長的大多數(shù)正常細胞。紹興細胞生物學膜片鉗技術應用

膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性：胞體表面不規(guī)整，現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場。紹興細胞生物學膜片鉗技術應用

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型，并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率，還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制。結合分子克隆和定點突變技術，膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。紹興細胞生物學膜片鉗技術應用