廈門藥理學(xué)腦片膜片鉗原理

膜片鉗操作實驗：膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心，它可用來作單通道或全細(xì)胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來說，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結(jié)構(gòu)，后者因用反饋電容取代了反饋電阻，降低了噪聲，所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門計算機硬件及相應(yīng)的軟件程序的相繼出現(xiàn)，使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高。如與EPC-9型膜片鉗放大器（內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡）配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT，它既可產(chǎn)生刺激波形，控制數(shù)據(jù)采集，又可分析數(shù)據(jù)，同時具有用于膜電容監(jiān)測的鎖相放大器，多種軟件功能集成于一體。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。廈門藥理學(xué)腦片膜片鉗原理

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。南通藥理學(xué)離子通道技術(shù)膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法。

膜片鉗實驗系統(tǒng)：根據(jù)不同的電生理實驗要求，可以組建不同的實驗系統(tǒng)，但有若干共同的基本部件，包括機械部分（防震工作臺、屏蔽罩、儀器設(shè)備架）、光學(xué)部分（顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng)）、電子部件（膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集的設(shè)備、計算機系統(tǒng)）和微操縱器在大多數(shù)膜片鉗實驗，要求所有實驗儀器及設(shè)備均具有良好的機械穩(wěn)定性，以使微電極與細(xì)胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器，其他設(shè)備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成，接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設(shè)備架要靠近工作臺，便于測量儀器與光學(xué)儀器配接。

膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動的技術(shù)。是用來研究單個離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實驗技術(shù)。這項技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)對實驗人員的技術(shù)要求非常高，一般地，實驗人員需要經(jīng)過嚴(yán)格的長期的訓(xùn)練，才能準(zhǔn)確且快速的操作。膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：全細(xì)胞式膜片方式使細(xì)胞內(nèi)與浴槽之間的漏流極少。

膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細(xì)胞膜形成高阻抗封接，導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄儀器反映這些變化，因而，膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外，還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數(shù)據(jù)采集卡、數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)等。膜片破裂再將玻管慢慢地從細(xì)胞表面垂直地提起，斷端游離部分自行融合成脂質(zhì)雙層。蘇州細(xì)胞生物學(xué)離子通道方案

膜片鉗使用的注意事項：在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲。廈門藥理學(xué)腦片膜片鉗原理

膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)及記錄方法：膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎(chǔ)研究知識與新藥開發(fā)時研究細(xì)胞電特性或小分子藥物對細(xì)胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標(biāo)靶藥物提供一個測試平臺。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作，實驗人員在取得元代細(xì)胞(例如心肌細(xì)胞與神經(jīng)元)后，將研究對象細(xì)胞養(yǎng)在玻片上，以手動方式將紀(jì)錄電極移動放置在胞體上方并壓到細(xì)胞膜上，此時紀(jì)錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。廈門藥理學(xué)腦片膜片鉗原理