胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化學小分子、核苷酸、某些鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留Antibiotic和其他外源分子。那么透析的效果如何?以及透析到何時呢?由于不可能監(jiān)測全部小分子,因此常選用葡萄糖為體現(xiàn)。血清中葡萄糖<5mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監(jiān)測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監(jiān)測pH值和滲透壓。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測。福州優(yōu)級胎牛血清品牌
如何挑選適合細胞生長的胎牛血清?原代或是正常細胞株建議使用BI特級胎牛血清,對生長條件要求高的細胞和干細胞可選用特級胎牛血清,或胚胎干細胞胎牛血清。由于血清有批間差異,細胞種類不同,我們建議客戶購買前可先申請試用樣品,通過篩選得到滿意的血清批號,之后根據(jù)項目需求可進行批量囤貨,以保證該項目所需血清質(zhì)量的一致性,可排除不同批號血清對于實驗帶來的影響。如何正確保存胎牛血清?需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請勿超過1個月,若一次無法用完一瓶,建議將血清無菌分裝并冷凍。舟山標準血清哪里有賣倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,請不要超過一個月。
胎牛血清對細胞貼壁中的作用:在細胞培養(yǎng)時,大部分來自實體組織感官的細胞會貼壁。它們在機體內(nèi)時,也是與其他細胞或者細胞外基質(zhì)結(jié)合的,貼壁對維持細胞的良好形態(tài)和促進細胞的增殖有益處。有人培養(yǎng)許旺細胞,發(fā)現(xiàn)貼壁良好的細胞,其增殖率也較高。人的造血干細胞培養(yǎng),更是需要有貼壁細胞構(gòu)成“造血微環(huán)境”。有人發(fā)現(xiàn)這些貼壁細胞包括成纖維細胞,巨噬細胞,上皮樣細胞,脂肪細胞,它們交錯連接,構(gòu)成網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)。培養(yǎng)基中加入牛血清,對于粘附細胞的貼壁也很有幫助。牛血清中含有玻連蛋白、纖黏連蛋白,對細胞粘附都有促進作用。需注意,熱滅活小牛血清會降低血清對細胞粘附的促進作用,尤其在細胞旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時更為明顯。
如何區(qū)別真假胎牛血清:外觀,拿到血清,較先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要,顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采的血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的點很分散,大多是由屠戶采的血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛血清。進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂??偟膩碚f,國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質(zhì)量較好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當然,熱滅活胎牛血清或保存不當?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。
胎牛血清的功能:胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到釋放毒性作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。胎牛血清不推薦做熱滅活,因為胎牛還未有發(fā)育完全的補體系統(tǒng)。舟山標準血清哪里有賣
胎牛血清保存避免反復凍融。福州優(yōu)級胎牛血清品牌
胎牛血清的處理方法有:熱滅活,F(xiàn)BS的常見處理方法是熱滅活,其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘,偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補體系統(tǒng)的任何成分,以及其他潛在的未知細胞生長抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染,這不再是一個問題,因為現(xiàn)在所有的血清產(chǎn)品都通過小到足以去除支原體的孔徑進行過濾。必須注意的是,熱滅活也可能產(chǎn)生不良影響,例如降低培養(yǎng)細胞附著在表面上的能力。熱滅活過程必須小心進行,因為溫度過高或長時間加熱會使生長因子失活,并產(chǎn)生沉淀物。福州優(yōu)級胎牛血清品牌
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