膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,故對細胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細胞骨架可能有所變化。另外這種膜片不能控制細胞內(nèi)成分。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2)內(nèi)面向外式膜片( inside outpatch)細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。膜片鉗使用的注意事項:干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。湖州全自動膜片鉗技術(shù)技術(shù)
膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,在此基礎上固定點位,對這膜片上的離子通道的離子電流(pA級)進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時,因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時,其間達到很小的分流電流。杭州全自動實用膜片鉗供應商膜片鉗使用操作注意:拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。
膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用:1.與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道:心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來,國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展,使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。2.對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。
膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,已經(jīng)成為現(xiàn)代細胞電生理的常規(guī)方法,它不只可以作為基礎生物醫(yī)學研究的工具,而且直接或間接為臨床醫(yī)學研究服務,目前膜片鉗技術(shù)普遍應用于神經(jīng)(腦)科學、心血管科學、藥理學、細胞生物學、病理生理學、中醫(yī)藥學、植物細胞生理學、運動生理等多學科領域研究。隨著全自動膜片鉗技術(shù)(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),膜片鉗技術(shù)因其具有的自動化、高通量特性,在藥物研發(fā)、藥物篩選中顯示了強勁的生命力。膜片鉗使用操作流程及注意事項:凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關(guān)要求。
膜片鉗實驗的細胞膜型:一個完整的細胞膜電學模型包含幾個基本組分:膜電容,膜電阻和膜電勢。這三個電學組分形成的原因各不相同:1、膜電容(membranecapacitance,Cm)的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層,對離子和其他水溶性物質(zhì)均不通透,遂使細胞膜成為了電的不良導體,進而導致細胞外液-磷脂雙分子層-細胞內(nèi)液構(gòu)成了細胞膜電容。Cm的大小與細胞膜表面積成正比,與磷脂雙分層的厚度成反比。膜電容在這里的作用,主要為完成細胞的充放電過程。2、膜電阻(membraneresistance,Rm)的形成是由于細胞膜上的蛋白質(zhì)通道,也就是離子通道的存在。離子和小的極性分子只有通過通道才能進出細胞膜,因此膜電阻在這里的作用,主要就是控制離子的進出。3、膜電勢(membranepotential,Vm)又稱膜電位,源自膜內(nèi)外離子濃度的差異,離子濃度的差異又源于細胞膜對離子的選擇透過性。膜電位一般可分為靜息電位、動作電位和等級電位(不懂的自己去查,此處不贅述)。膜電位的作用主要是維持神經(jīng)元的興奮性,并改變離子通道的狀態(tài)。膜片鉗使用的注意事項:打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。湖州全自動膜片鉗技術(shù)技術(shù)
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。湖州全自動膜片鉗技術(shù)技術(shù)
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎上發(fā)展起來的,電壓鉗是利用負反饋技術(shù)將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值,以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律,而無法反映單個通道的活動特點,同時通過細胞內(nèi)微電極引導記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗技術(shù)的優(yōu)勢是可利用負反饋電子線路,將微電極吸附的1μm2至幾個平方微米細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)的觀察。湖州全自動膜片鉗技術(shù)技術(shù)
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