膜片鉗實驗的細胞膜型:一個完整的細胞膜電學(xué)模型包含幾個基本組分:膜電容,膜電阻和膜電勢。這三個電學(xué)組分形成的原因各不相同:1、膜電容(membranecapacitance,Cm)的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層,對離子和其他水溶性物質(zhì)均不通透,遂使細胞膜成為了電的不良導(dǎo)體,進而導(dǎo)致細胞外液-磷脂雙分子層-細胞內(nèi)液構(gòu)成了細胞膜電容。Cm的大小與細胞膜表面積成正比,與磷脂雙分層的厚度成反比。膜電容在這里的作用,主要為完成細胞的充放電過程。2、膜電阻(membraneresistance,Rm)的形成是由于細胞膜上的蛋白質(zhì)通道,也就是離子通道的存在。離子和小的極性分子只有通過通道才能進出細胞膜,因此膜電阻在這里的作用,主要就是控制離子的進出。3、膜電勢(membranepotential,Vm)又稱膜電位,源自膜內(nèi)外離子濃度的差異,離子濃度的差異又源于細胞膜對離子的選擇透過性。膜電位一般可分為靜息電位、動作電位和等級電位(不懂的自己去查,此處不贅述)。膜電位的作用主要是維持神經(jīng)元的興奮性,并改變離子通道的狀態(tài)。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:膜電位固定的方法不同。廣州神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
膜片鉗電生理技術(shù)的樣本種類:從較早的肌細胞、神經(jīng)元和內(nèi)分泌細胞發(fā)展到血細胞、肝細胞、耳蝸毛細胞、胃壁細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、免疫細胞、精母細胞等多種細胞;從急性分散細胞和培養(yǎng)細胞發(fā)展到組織片乃至整體動物;從蝸牛、青蛙、蠑螈、爪蟾母細胞發(fā)展到雞細胞、大鼠細胞、人細胞等;從動物細胞發(fā)展到細菌及植物細胞。此外,膜片鉗技術(shù)還普遍地應(yīng)用到平面雙分子層(planarbilayer)、脂質(zhì)體(liposome)等人工標本上。研究對象:從對離子通道(配體門控性離子通道、電壓門控性離子通道、第二信使介導(dǎo)的離子通道、機械敏感性離子通道及縫隙連接通道等)的研究發(fā)展到對離子泵、交換體及可興奮細胞的胞吞、胞吐機制的研究等。膜片鉗電極已不單單是傳統(tǒng)意義上的電信號記錄電極,它還可作為其他研究方法的工具使用,如用于進行單細胞PCR技術(shù)時的細胞內(nèi)容物抽吸。紹興藥理學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)膜片鉗技術(shù)在可興奮細胞如神經(jīng)元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關(guān)重要的作用。
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點:又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經(jīng)這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內(nèi)電位不變,則電極下的一小片細胞膜兩側(cè)的電位差就不變,從而實現(xiàn)電位固定另外,高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率,如時間分辨率可達10μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12A。記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎(chǔ)上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率。
膜片鉗芯片技術(shù)是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù)。由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數(shù)和細胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實時檢測等優(yōu)點.因此,該芯片技術(shù)將很大促進細胞離子通道、細胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用。具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺細胞研究的比較新進展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對采用膜片鉗芯片技術(shù)在細胞和分子水平上研究味覺的敏感機理和傳導(dǎo)機制的應(yīng)用前景進行了展望。膜片鉗使用的注意事項:向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多,以防液體進入銀絲底部增加噪聲。
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù):膜片鉗技術(shù)的建立,對生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低。廣州細胞生物學(xué)電生理膜片鉗研究方案
膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。廣州神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。廣州神經(jīng)生物學(xué)離子通道網(wǎng)站
上海司鼎生物科技有限公司是一家從事免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及售后的服務(wù)型企業(yè)。公司坐落在放鶴路1088號,成立于2016-06-07。公司通過創(chuàng)新型可持續(xù)發(fā)展為重心理念,以客戶滿意為重要標準。在孜孜不倦的奮斗下,公司產(chǎn)品業(yè)務(wù)越來越廣。目前主要經(jīng)營有免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)等產(chǎn)品,并多次以醫(yī)藥健康行業(yè)標準、客戶需求定制多款多元化的產(chǎn)品。司鼎;OriCell為用戶提供真誠、貼心的售前、售后服務(wù),產(chǎn)品價格實惠。公司秉承為社會做貢獻、為用戶做服務(wù)的經(jīng)營理念,致力向社會和用戶提供滿意的產(chǎn)品和服務(wù)。上海司鼎生物科技有限公司以市場為導(dǎo)向,以創(chuàng)新為動力。不斷提升管理水平及免疫印跡(WB)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù),在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)產(chǎn)品質(zhì)量。本公司以良好的商品品質(zhì)、誠信的經(jīng)營理念期待您的到來!