溫州全自動膜片鉗技術方案

膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式：全細胞記錄構型(whole-cell recording)　高阻封接形成后，繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂，電極胞內液直接相通，而與浴槽液絕緣，這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄，或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級，全細胞鉗的串聯電阻(玻管和細胞內部之間的電阻)應當補償。任何流經膜的電流均流經這一電阻，所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內的真正電位。電流愈大，愈需對串聯電阻進行補償。膜片鉗的應用：對單細胞形態(tài)與功能關系的研究。溫州全自動膜片鉗技術方案

膜片鉗實驗中電極制備的要求：合格的膜片微電極是成功封接細胞膜的基本條件。要成功的封接細胞膜需要兩方面的因素保證，一是設法造成干凈的細胞膜表面，二是制成合格的電極。首先要選擇適當的玻璃毛細管，其材料可使用軟質玻璃（蘇打玻璃、電石玻璃）或硬質玻璃（硼硅玻璃、鋁硅玻璃、石英玻璃）。軟玻璃電極常用于作全細胞記錄，硬質玻璃因導電率低、噪聲小而常用于離子單通道記錄。膜片微電極是將玻璃毛細管用電極拉制儀拉制而成的，制作分三步進行：一是分兩次拉制；第二步是在電極前端涂以硅酮樹脂（sylgard）；第三步是拋光。全自動腦片膜片鉗網站膜片鉗在通道研究中的重要作用：利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。

膜片鉗電生理技術服務實驗流程之電機制備和實驗的記錄和分析數據：電極制備：膜片微電極是將玻璃毛細管用電極拉制儀拉制而成的，主要分為以下步驟：拉制：膜片微電極是將玻璃毛細管用拉管儀拉制而成。涂硅酮樹酯：將硅酮樹酯涂于微電極的較尖銳端以外的部分，然后將其通過加熱鎳鉻電阻線圈而烘干變固。熱刨光：在顯微鏡下，將微電極尖銳端接近熱源進行熱刨光處理可提高巨阻抗封接的成功率。充灌微電極液：用于灌充微電極的液體需經為空濾膜過濾，除去妨礙巨阻抗封接形成的灰塵。進行實驗，記錄和分析數據：準備工作就緒后即可進行實驗操作，數據記錄和分析。

膜片鉗電生理技術服務實驗流程之標本制備和膜片鉗實驗系統(tǒng)：標本制備：根據研究目的的不同，可采用不同的細胞組織，如心肌細胞、平滑肌細胞、腫瘤細胞等，現在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞，必須滿足實驗要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細胞培養(yǎng)法；另外，由于與分子生物學技術的結合，現在也運用分子克隆技術表達不同的離子通道，如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。膜片鉗實驗系統(tǒng)：根據不同的電生理實驗要求，可以組建不同的實驗系統(tǒng)，但有若干共同的基本部件，包括機械部分（防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架）、光學部分（顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng)）、電子部件（膜片鉗放大器、刺激器、數據采集設備、計算機系統(tǒng)）和微操縱器。為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。

膜片鉗的應用：對藥物作用機制的研究：在通道電流記錄中，可分別于不同時間、不同部位（膜內或膜外）施加各種濃度的藥物，研究它們對通道功能的可能影響，了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機理。這是膜片鉗技術應用較普遍的領域，既有對西藥藥物機制的探討，也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導的大鼠大腦皮層神經元L-型鈣通道的開放，從而減少鈣內流，對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報道采用細胞貼附式單通道記錄法發(fā)現烏頭堿對培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標：極大的減少了噪聲源，記錄數據的電噪音很低。藥理學離子通道哪家好

膜片鉗使用的注意事項：浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。溫州全自動膜片鉗技術方案

膜片鉗技術是通過微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細胞膜，用千兆歐姆以上的阻抗使之封接，在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域（膜片）以及其周圍，在此基礎上固定點位，對這膜片上的離子通道的離子電流（pA級）進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構成的I-V轉換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位，向正輸入端子施加指令電位時，因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用，字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時，其間達到很小的分流電流。溫州全自動膜片鉗技術方案

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