嘉興藥理學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

腦片膜片鉗實(shí)驗(yàn)全細(xì)胞記錄：用可視化膜片鉗尋找清楚、且表面光滑、折光性較好的突觸后神經(jīng)元。在加了正壓后，將記錄電極移入腦片視野中，并接近事先選好的神經(jīng)元，然后，調(diào)整電極與神經(jīng)元的相對位置，利用負(fù)壓形成穩(wěn)定的高阻封接。用短簇的脈沖負(fù)壓使細(xì)胞破膜，穩(wěn)定2~3分鐘，觀察封接測試波形起始段與基線間的差值是否在100pA以內(nèi)，封接電阻是否大于200M，如果是，且較穩(wěn)定，再迅速補(bǔ)償串聯(lián)電阻和慢電容，舍棄串聯(lián)電阻大于30M的細(xì)胞，且在記錄過程中監(jiān)測串聯(lián)電阻的變化，當(dāng)變化大于20%時，中止記錄。如果細(xì)胞狀態(tài)不好，就馬上重新制備腦片，以提高實(shí)驗(yàn)效率。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別：電壓鉗技術(shù)只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。嘉興藥理學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗法的各種模式：細(xì)胞吸附模式：將膜片微電極吸附在細(xì)胞膜上對但離子通道電流進(jìn)行記錄的模式。其優(yōu)點(diǎn)是在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境保持正常的條件下可以對離子通道活動進(jìn)行觀察記錄。但是由于不能認(rèn)為直接地控制細(xì)胞內(nèi)環(huán)境條件也不能確切的潘明細(xì)胞內(nèi)點(diǎn)位，所以其缺點(diǎn)是不清楚膜片上的實(shí)效點(diǎn)位。膜內(nèi)面向外模式：從細(xì)胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時，則膜片即從細(xì)胞體上被切割分隔下來，形成膜內(nèi)面向外的模式。常規(guī)全細(xì)胞模式：在細(xì)胞吸附模式上將膜打穿成孔，記錄膜片以外部位的全細(xì)胞膜的離子電流，這時全細(xì)胞模式。上海藥理學(xué)腦定位膜片鉗哪家好膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別：膜電位固定的方法不同。

膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)及記錄方法：細(xì)胞膜由雙層脂膜組成，具有密封絕緣的特性，因此當(dāng)紀(jì)錄 電極接觸到細(xì)胞膜時電阻會開始上升，然后以人工方式對紀(jì)錄電極內(nèi)施加一個負(fù)壓，可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升，當(dāng)紀(jì)錄電極的電阻達(dá)到千兆歐姆(Giga Ω)時，意味著細(xì)胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出，之后對電極內(nèi)壓力施以一個快速的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破，這樣紀(jì)錄電極與細(xì)胞胞體之間會形成一個封閉的電容，此時就可以開始對細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn)：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細(xì)胞膜面積不同，進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗使用操作注意：電腦里面的軟件不得隨意刪改。

膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù)，用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10～100的密封(giga-seal)，又稱巨阻封接，被孤立的小膜片面積為μm量級，內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實(shí)行電壓鉗位，可測量單個離子通道開放產(chǎn)生的pA（10的負(fù)12次方安培）量級的電流，這種通道開放是一種隨機(jī)過程。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化，可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來，以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對小細(xì)胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。膜片鉗使用操作注意：不得在本機(jī)電腦下載別的軟件，拷數(shù)據(jù)時需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。嘉興藥理學(xué)膜片鉗成像網(wǎng)站

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。嘉興藥理學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程之電機(jī)制備和實(shí)驗(yàn)的記錄和分析數(shù)據(jù)：電極制備：膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管用電極拉制儀拉制而成的，主要分為以下步驟：拉制：膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管用拉管儀拉制而成。涂硅酮樹酯：將硅酮樹酯涂于微電極的較尖銳端以外的部分，然后將其通過加熱鎳鉻電阻線圈而烘干變固。熱刨光：在顯微鏡下，將微電極尖銳端接近熱源進(jìn)行熱刨光處理可提高巨阻抗封接的成功率。充灌微電極液：用于灌充微電極的液體需經(jīng)為空濾膜過濾，除去妨礙巨阻抗封接形成的灰塵。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄和分析數(shù)據(jù)：準(zhǔn)備工作就緒后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，數(shù)據(jù)記錄和分析。嘉興藥理學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

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