冷凍電子顯微技術(shù)學解析生物大分子及細胞結(jié)構(gòu)的中心是透射電子顯微鏡成像,包括樣品制備、圖像采集、圖像處理及三維重構(gòu)等幾個基本步驟。三維重構(gòu):數(shù)據(jù)處理的較終目的是為了獲得生物樣品的三維質(zhì)量密度圖,由二維圖像推知三維結(jié)構(gòu)的方法即三維重構(gòu)。其理論原理是在1968年由DeRosier和Klug提出的中心截面定理:一個函數(shù)沿某方向投影函數(shù)的傅里葉變換等于此函數(shù)的傅里葉變換通過原點且垂直于此投影方向的截面函數(shù)。由于樣品性質(zhì)的不同,圖像分析的方法也有差異。冷凍電鏡技術(shù)中單顆粒分析法優(yōu)點:解析生物大分子的理論分辨率可達原子級。莆田TEM技術(shù)用途
冷凍電鏡技術(shù)具有分辨率高、更接近天然狀態(tài)、適用研究對象普遍等特點,越來越多的科學家開始把冷凍電鏡技術(shù)作為研究的一個新方向。冷凍電鏡技術(shù)與X射線技術(shù)和核磁共振技術(shù)互相補充,讓絕大多數(shù)的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)都可以被解析。眾多領(lǐng)域的研究者們將在未來冷凍電鏡新的技術(shù)方法的開發(fā)中發(fā)揮重要的作用,成為該技術(shù)的進一步完善與成熟的重要力量。冷凍電鏡領(lǐng)域研究者們則需要以主動開放的態(tài)度吸引其他領(lǐng)域研究者的合作,并積極迎接來自更多領(lǐng)域研究者的挑戰(zhàn),保持并發(fā)展自己的技術(shù)特長,站在技術(shù)發(fā)展的制高點上選準研究方向,始終在冷凍電鏡的技術(shù)前沿上開疆拓土。合肥冷凍透射電子顯微鏡技術(shù)品牌冷凍電鏡技術(shù)的獨特優(yōu)勢:它與X射線晶體學、核磁共振一起構(gòu)成了結(jié)構(gòu)生物學研究的基礎(chǔ)。
冷凍電鏡技術(shù)也正在成為助力醫(yī)藥研發(fā)的有力手段。依托對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的理解,科學家正在開發(fā)更有效的治Ca藥、打菌素、止痛藥、麻醉劑等。中國過去10多年里,建成了世界上較大的冷凍電鏡設施。中國的科學家,也在冷凍電鏡領(lǐng)域取得了很多舉世矚目的成就,引起了世界的普遍關(guān)注。比如清華大學的施一公團隊,對老年癡呆癥相關(guān)的重要蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進行了解析,對于我們理解它的發(fā)病機理甚至開發(fā)重要治療方法有重要意義。他們對剪接體復合體一系列結(jié)構(gòu)的研究幫助我們理解細胞的演化、細胞的基因調(diào)控和其他一些相關(guān)疾病有著重要意義。2019年,中國科學家利用冷凍電鏡技術(shù)解析到世界上目前分辨率較高的豬瘟病毒結(jié)構(gòu),這對我們了解該病毒的發(fā)病機理,以及如何更好開發(fā)疫苗具有重要意義。
什么是冷凍電鏡技術(shù)?冷凍電鏡技術(shù),全稱是冷凍電子顯微鏡技術(shù),是在低溫下使用透射電子顯微鏡觀察樣品的顯微技術(shù)。冷凍電鏡技術(shù),是一種重要的結(jié)構(gòu)生物學研究方法,它與X射線晶體學、核磁共振一起構(gòu)成了高分辨率結(jié)構(gòu)生物學研究的基礎(chǔ)。冷凍電鏡技術(shù)的研究,主要是冷凍成像和蛋白快速冷凍技術(shù)。根據(jù)諾貝爾獎評委會的說法,冷凍電鏡技術(shù)使生物分子成像,變得更加簡單,把生物化學帶入了一個新紀元。這項技術(shù)可以用來確定,溶液中生物分子的高清晰度結(jié)構(gòu)。冷凍電鏡技術(shù)其實比較抽象,一直以來它主要的問題是其圖像噪音極高、信號極低,研究的目標是從中提取近原子分辨率的結(jié)構(gòu)信息。可以形象的比喻為在一個機器轟鳴的工廠,監(jiān)測一只螞蟻爬行的聲音。冷凍電鏡的目標,就是要完成這項艱巨的任務。因此,可見這項技術(shù)成果的科學價值。冷凍電鏡技術(shù)具有更接近天然狀態(tài)、適用研究對象普遍等優(yōu)勢。
冷凍電鏡技術(shù)究竟是什么呢?一直以來,科學家們不斷進行基礎(chǔ)生命科學的探究,探究細胞內(nèi)的生命規(guī)律,為人類健康及其他學科提供借鑒。而分子是生命體中行使功能的較小單元,生命科學研究也逐步發(fā)展到了微觀生物分子的結(jié)構(gòu)與功能研究階段,以期逐步加深對生命過程的認知。充分的基礎(chǔ)研究不只能幫助我們深刻認識生命過程,并且能夠幫助改善人類健康和提高人類生活質(zhì)量??茖W家們能夠通過生命科學研究幫助確定新的藥物靶點,并進行基于靶點的藥物篩選,提高藥物研究的成功率、安全性和有效性。并且隨著生物制品尤其抗體大分子藥物的發(fā)展,冷凍電鏡技術(shù)越來越多地應用于活性生物分子結(jié)構(gòu)的解析中。冷凍電鏡技術(shù)能夠提供生理環(huán)境下大分子復合物納米、亞納米甚至近原子尺度的原位結(jié)構(gòu)信息。黃石低溫冷凍透射電鏡技術(shù)原理
冷凍電鏡技術(shù)的獨特優(yōu)勢:冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結(jié)構(gòu)的大分子進行研究。莆田TEM技術(shù)用途
冷凍電子顯微鏡技術(shù)中電子斷層掃描重構(gòu)技術(shù):電子斷層掃描技術(shù)是從一個物體的投影圖像重構(gòu)獲得物體內(nèi)部結(jié)構(gòu)的技術(shù),通過獲取同一物體的多個連續(xù)角度下的二維投影圖來反向重構(gòu)它的三維結(jié)構(gòu)。簡單地說,電子斷層掃描技術(shù)就是將一個物體(樣品)沿著一個與電子束垂直的軸旋轉(zhuǎn),每旋轉(zhuǎn)一個角度,采集這個物體在相對應方向上的二維投影像,通過對這些二維投影圖的處理(相互配準),將不同角度的二維投影圖反向重構(gòu)(如加權(quán)背投影等方法),獲得樣品整體三維結(jié)構(gòu)的技術(shù)。電子斷層成像適合于在納米級尺度上研究不具有結(jié)構(gòu)均一性的蛋白、病毒、細胞器以及它們之間組成的復合體的三維結(jié)構(gòu)。與電子晶體學和單顆粒技術(shù)相比,這種技術(shù)無需樣品顆粒具有結(jié)構(gòu)同一性,也不強調(diào)樣品具有一定的對稱性。因此,雖然目前電子斷層成像所獲得的結(jié)構(gòu)的分辨率(約4~10納米)不能與以上兩種技術(shù)相比,但其在研究非定形、不對稱和不具全同性的生物樣品的三維結(jié)構(gòu)和功能中有著不可替代的作用。莆田TEM技術(shù)用途
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