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膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的實驗流程：（1）破膜：加大微電極內(nèi)的負(fù)壓將細胞膜吸破，此時可見時間常數(shù)較大的全細胞膜電容電流的出現(xiàn)，以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸；②也可用注射器施加負(fù)壓；③還可以在施加負(fù)壓的基礎(chǔ)上進行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜，形成的入口電阻Ra較大。（2）細胞破膜后，若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高，則應(yīng)該將所施加的負(fù)壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉；反之，適當(dāng)保留一點負(fù)壓對破膜狀態(tài)及細胞的穩(wěn)定更有利。（3）全細胞膜電容補償：調(diào)節(jié)全細胞膜電容補償板塊中的Cm和Rs進行膜電容電流補償，使輸出電流信號中細胞膜電容電流成分消失或變至較小。（4）串聯(lián)電阻補償：打開串聯(lián)電阻補償鍵，調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補償至不產(chǎn)生震蕩為度。（5）漏減調(diào)節(jié)。（6）正式進入標(biāo)本細胞的檢測。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡。南京細胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù)，用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10～100的密封(giga-seal)，又稱巨阻封接，被孤立的小膜片面積為μm量級，內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，可測量單個離子通道開放產(chǎn)生的pA（10的負(fù)12次方安培）量級的電流，這種通道開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化，可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細胞膜上分離出來，以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進行實驗研究。這種技術(shù)對小細胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。廣州藥理學(xué)實用膜片鉗哪家好膜片鉗的應(yīng)用：與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。

膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細胞膜，用千兆歐姆以上的阻抗使之封接，在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域（膜片）以及其周圍，在此基礎(chǔ)上固定點位，對這膜片上的離子通道的離子電流（pA級）進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應(yīng)管運算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當(dāng)場效應(yīng)管運算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位，向正輸入端子施加指令電位時，因為短路負(fù)端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用，字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時，其間達到Z小的分流電流。

膜片鉗的應(yīng)用：在心血管藥理研究中的應(yīng)用：隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的普遍應(yīng)用，對血管疾病和藥物作用的認(rèn)識不只得到了不斷更新，而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點。正如諾貝爾基金會在頒獎時所說：“Neher和Sadmann的貢獻有利于了解不同疾病機理，為研制新的更為有效的藥物開辟了道路”。創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選：在離子通道高通量篩選中主要是進行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢、信息量要求不太高的初級篩選。較近幾年，分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點與自動化、微量化技術(shù)相結(jié)合，產(chǎn)生了自動化膜片鉗等一些新技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：在心血管藥理方面的研究。

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實驗流程之標(biāo)本制備和膜片鉗實驗系統(tǒng)：標(biāo)本制備：根據(jù)研究目的的不同，可采用不同的細胞組織，如心肌細胞、平滑肌細胞、腫瘤細胞等，現(xiàn)在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞，必須滿足實驗要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細胞培養(yǎng)法；另外，由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合，現(xiàn)在也運用分子克隆技術(shù)表達不同的離子通道，如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。膜片鉗實驗系統(tǒng)：根據(jù)不同的電生理實驗要求，可以組建不同的實驗系統(tǒng)，但有若干共同的基本部件，包括機械部分（防震工作臺、屏蔽罩、儀器設(shè)備架）、光學(xué)部分（顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng)）、電子部件（膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集設(shè)備、計算機系統(tǒng)）和微操縱器。膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。嘉興醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)設(shè)計公司

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別：膜電位固定的方法不同。南京細胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

膜片鉗技術(shù)之全細胞式與細胞吸附式的區(qū)別：全細胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細胞吸附式?jīng)]啥兩樣，無非就是把電極戳在細胞上然后記錄它的電活動。但事實是，這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上：在cell-attached的記錄中，我們不需要用電極戳破細胞膜，只需將其懟在細胞膜上即可；但在whole-cell的記錄中，我們不只要將電極懟進細胞膜內(nèi)，而且還不能懟得過深或過淺，否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是，要形成全細胞記錄必須打破細胞膜，但由于這個操作比較厲害，所以要破膜時請相信玄學(xué)。其次，第二大區(qū)別在電阻補償上：在cell-attached的記錄中，由于我們無需打通細胞內(nèi)外膜，因此細胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中，但是在whole-cell中，串聯(lián)電阻（Rs）就存在了，因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細胞的跨膜電位，故我們需要對其進行補償。這些注意事項包括：電極電容及細胞膜電容補償問題，漏電流問題，液接電位的校正問題，空間鉗位問題，細胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題，電極內(nèi)液的成分問題等。南京細胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

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