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為何血清會(huì)存在批間差?如何避免此影響?因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物,其組成成分有1000種左右,每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的,因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響,XP建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試,篩選合適的批號(hào),備好庫(kù)存(血清未開(kāi)封時(shí),在-20℃下可保存5年)。如需更換血清批次或產(chǎn)地,建議先試用后再大量訂購(gòu)。血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何預(yù)防和處理沉淀?血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘連蛋白,磷酸鈣[1](顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀),膽固醇等。原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復(fù)凍融,長(zhǎng)期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。預(yù)防措施與建議:因此不立即使用的血清應(yīng)保存在-20℃或以下。血清指在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。徐州無(wú)外泌體血清供應(yīng)商
多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下,熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng),卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩。所以胎牛血清不推薦熱滅活。熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗(yàn)中,通過(guò)加熱滅活掉血清中的補(bǔ)體,以避免對(duì)免疫試驗(yàn)的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導(dǎo)致胎牛血清中部分重要的生長(zhǎng)因子的活性衰減,進(jìn)而影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。蕪湖優(yōu)等胎牛血清報(bào)價(jià)胎牛血清的細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。
購(gòu)買回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),使用時(shí)需要融化,融化過(guò)程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會(huì)表現(xiàn)出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍。很多培養(yǎng)細(xì)胞的寶寶會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題。那么,血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么?纖維蛋白,它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物,可以達(dá)到1-2mm,可以用肉眼觀察到。磷酸鈣,它也是常見(jiàn)的一種沉淀物,通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁,并且在37℃培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn),這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng),因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì),它們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見(jiàn)原因。關(guān)于細(xì)胞生長(zhǎng),其實(shí)很多試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng),當(dāng)然血清生產(chǎn)商也是這樣說(shuō)的。
胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)不過(guò)百年歷史,但發(fā)展得相當(dāng)快,每年的需求量也不斷上升。在胎牛血清和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的方面,國(guó)外起步較早,認(rèn)識(shí)也較深入。應(yīng)該說(shuō),胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)基方面,具有的優(yōu)勢(shì)。因?yàn)槠錉I(yíng)養(yǎng),所以幾乎適合所有類型的細(xì)胞生長(zhǎng),每種細(xì)胞都可以從中攝取自己所需的養(yǎng)分。而且,胎牛血清還含有適合細(xì)胞貼壁鋪展以及抗氧化和醫(yī)治的成分,這使得它成為天然通用的很好培養(yǎng)基。據(jù)研究,胎牛血清中含有至少四百多種成分,而且這些成分的含量在不同批次的血清中存在波動(dòng),有時(shí)甚至波動(dòng)較大。因此,在持續(xù)使用胎牛血清時(shí),要注意盡量同一批次的。通常,同一批次的血清數(shù)量有限,一次大約不超過(guò)2000升。因此,在更換批次時(shí),要注意觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和狀態(tài)。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。
那么如何保障胎牛血清的品質(zhì)呢:內(nèi)有毒的,內(nèi)有毒的含量越低的血清,胎牛血清級(jí)別就越高:內(nèi)有毒的≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;10EU/ml<內(nèi)有毒的≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;內(nèi)有毒的≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;應(yīng)選取內(nèi)有毒的含量低的胎牛血清,使培養(yǎng)的細(xì)胞更健康。如果選取內(nèi)有毒的較高的血清,細(xì)胞一直泡在“毒液”里,短期內(nèi)細(xì)胞看不出太明顯的變化,但長(zhǎng)期的話細(xì)胞會(huì)衰老得較快,從而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成嚴(yán)重影響。微生物:微生物包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝可以對(duì)細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。同時(shí)3次0.1um過(guò)濾可以完全祛除支原體(支原體直徑0.2~0.3um)。通過(guò)病毒的檢測(cè),可以嚴(yán)格控制牛腹瀉、牛細(xì)小、藍(lán)舌病等病毒。通過(guò)非瘋牛病疫區(qū)生產(chǎn)還可避免朊病毒。血清提供和各種生長(zhǎng)因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)、類固醇(雌二醇、睪酮、孕酮)等。深圳標(biāo)準(zhǔn)血清價(jià)格
胎牛血清有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到醫(yī)治作用。徐州無(wú)外泌體血清供應(yīng)商
不同產(chǎn)地的胎牛血清,品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是,胎牛血清是動(dòng)物源生物制品,我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定,目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來(lái)源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)注血源地。這意味著,其他血源地的胎牛血清在我國(guó)是不允許進(jìn)口的,在選購(gòu)進(jìn)口產(chǎn)品時(shí),要規(guī)避選取來(lái)源為禁止輸入國(guó)家的相關(guān)產(chǎn)品。合法進(jìn)口的胎牛血清需符合我國(guó)海關(guān)和檢驗(yàn)檢疫部門的監(jiān)管要求,具備真實(shí)完整的進(jìn)口貨物報(bào)關(guān)單和出入境檢驗(yàn)檢疫入境貨物檢驗(yàn)檢疫證明。選購(gòu)胎牛血清時(shí),需要核對(duì)廠家是否能提供購(gòu)買批次的進(jìn)口報(bào)關(guān)單和檢驗(yàn)檢疫證書,烏拉圭來(lái)源的血清還必須具有出口許可證,確保產(chǎn)品來(lái)源安全可追溯。徐州無(wú)外泌體血清供應(yīng)商
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