研制小動(dòng)物三維在體光纖成像記錄,該成像設(shè)備以雙光子激發(fā)成像模態(tài)為中心,有機(jī)融合光片照明顯微成像模態(tài),從細(xì)胞分子、結(jié)構(gòu)圖譜和功能回路多個(gè)層面系統(tǒng)多方面地提供生物體的神經(jīng)回路信息。圍繞小動(dòng)物三維在體神經(jīng)回路成像設(shè)備研制這一中心目標(biāo),將會(huì)涉及到成像設(shè)備、圖像算法、軟件平臺(tái)、驗(yàn)證評價(jià)以及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用等多方面研究。從生物體在體神經(jīng)回路深層和快速的成像要求出發(fā),研制有機(jī)融合多光子深層激發(fā)成像模態(tài)和光片照明快速掃描顯微成像模態(tài)于一體的小動(dòng)物三維在體神經(jīng)回路成像設(shè)備,研發(fā)適用于快速動(dòng)態(tài)神經(jīng)回路成像的影像信息處理與分析平臺(tái),建立小動(dòng)物三維在體神經(jīng)回路成像設(shè)備的醫(yī)學(xué)生物驗(yàn)證評價(jià)體系,開展小動(dòng)物預(yù)臨床生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究,為小動(dòng)物腦疾病模型在體神經(jīng)回路的機(jī)理研究提供成像方法和工具。用成熟的在體光纖成像記錄進(jìn)行體外檢測。黃石鈣熒光成像光纖原理
在體光纖成像記錄熒光素酶的每個(gè)催化反應(yīng)只產(chǎn)生一個(gè)光 子 , 通常肉眼無法直接觀察到, 而且光子在強(qiáng)散射性的生物組織中傳輸時(shí), 將會(huì)發(fā)生吸收、 散射、 反射、 透射等大量光學(xué)行為 。 因此,必須采用高 靈敏度的光學(xué)檢測儀器( 如CCD camera)采集并定量檢測生物體內(nèi)所發(fā)射的光子數(shù)量, 然后將其轉(zhuǎn)換成圖像, 在體生物發(fā)光成像中的發(fā)光光譜范圍通常為可見光到 近紅外光波段, 哺乳動(dòng)物體內(nèi)血紅蛋白主要吸收可見光, 水和脂質(zhì)主要吸收紅外線, 但對波長為 590~1500nm的紅光至近紅外線吸收能力則較差, 因此, 大部分波長超過600nm的紅光, 經(jīng)過散射、吸收后能夠穿透哺乳動(dòng)物組織, 被生物體外的高靈敏光學(xué)檢測儀器探測到, 這是在體生物發(fā)光成像的理論基礎(chǔ)。黃石鈣熒光成像光纖原理在體光纖成像記錄同時(shí)不受外界光纖干擾。
在體光纖成像記錄進(jìn)行小動(dòng)物顯像,首先是利用醫(yī)用回旋加速器發(fā)生的核反應(yīng),生產(chǎn)正電子放射性核素,通過有機(jī)合成、無機(jī)反應(yīng)或生化合成制備各種小動(dòng)物正電子顯像劑或示蹤物質(zhì)。顯像劑引入體內(nèi)定位于靶系統(tǒng),利用顯像儀采集信息顯示不同斷面圖并給出定量生理參數(shù)。具備優(yōu)異的特異性、敏感性和能定量示蹤標(biāo)記物;所使用的放射性核素多為動(dòng)物生理活動(dòng)需要的元素,因此不影響它的生物學(xué)功能,放射性標(biāo)記物進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后,由于其本身的特點(diǎn),能夠聚集在特定的組織系統(tǒng)或參與組織細(xì)胞的代謝。
在體光纖成像記錄在自由活動(dòng)動(dòng)物的深部腦區(qū)實(shí)現(xiàn)光信號記錄和神經(jīng)細(xì)胞活性調(diào)控;高質(zhì)量,亞細(xì)胞分辨率的成像;多波長成像,實(shí)現(xiàn)較多的鈣離子成像(GCaMP or RCaMP),和光遺傳實(shí)驗(yàn),特定目標(biāo)光刺激;在體光纖成像系統(tǒng)是模塊化設(shè)計(jì),使用者擁有很高的靈活性,可以隨時(shí)根據(jù)研究需要對系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整,比如調(diào)整光源,波長,濾光片,相機(jī)等。在深部腦區(qū)選定的特定神經(jīng)細(xì)胞或部分獲得連續(xù)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)流,然后對單細(xì)胞提取密度軌跡。鈣離子成像軌跡也可以被同步,與其他行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(攝像拍攝,獎(jiǎng)勵(lì)設(shè)備等)同步時(shí)間標(biāo)記。在體光纖成像記錄為實(shí)現(xiàn)成像,需要將光束聚焦成很小的光點(diǎn)。
在體光纖成像記錄成像原理熒光物質(zhì)被激發(fā)后所發(fā)射的熒光信號的強(qiáng)度在一定的范圍內(nèi)與熒光素的量成線性關(guān)系。熒光信號激發(fā)系統(tǒng)(激發(fā)光源、光路傳輸組件)、熒光信號收集組件、信號檢測以及放大系統(tǒng)。發(fā)射的熒光信號的波長范圍一般在可見到紅外區(qū)域的居多。因?yàn)楣獾牟ㄩL越長對組織的穿透力越強(qiáng),所以對于能夠發(fā)射出波長較長的近紅外熒光的材料是我們所追求的。目前有很多熒光染料已經(jīng)商業(yè)化,用于對細(xì)胞內(nèi)部的各個(gè)細(xì)胞器進(jìn)行染色,呈現(xiàn)出不同波長的發(fā)射光,從而有利于對單個(gè)生物功能分子的體內(nèi)連續(xù)追蹤,詳細(xì)地記錄其生理過程。在體光纖成像記錄可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。黃石鈣熒光成像光纖原理
在體光纖成像記錄其他行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(攝像拍攝,獎(jiǎng)勵(lì)設(shè)備等)同步時(shí)間標(biāo)記。黃石鈣熒光成像光纖原理
在體光纖成像記錄的應(yīng)用,揭示機(jī)體的生理病理改變過程,目前, 在體生物光學(xué)成像技術(shù)己成功應(yīng)用于 干細(xì)胞移植、 壞掉的免疫、 毒血癥、 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 皮炎等發(fā)病機(jī)制的研究中, 可以實(shí)時(shí)監(jiān)測生物機(jī)體的生理、病理改變過程, 具有重要的臨床意義。藥物的篩選和評價(jià)的應(yīng)用目前 , 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型己大量應(yīng)用于病理研究、藥物研發(fā)、 藥物篩選和藥物評價(jià)等領(lǐng)域。通過體外基因轉(zhuǎn)染或直接注射等手段, 將熒光素酶或綠色熒光蛋 自等報(bào)告基因標(biāo)記在生物體內(nèi)的任何細(xì)胞, 如:壞掉的細(xì)胞、 造血細(xì)胞等上, 采用在體生物光學(xué)成像技術(shù)對其示蹤, 了解細(xì)胞在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)移規(guī)律,不單能夠檢測轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體 內(nèi)的基因表達(dá)或 內(nèi)源性基因的活性和功能, 而且能夠?qū)λ幬锖Y選及療效進(jìn)行評價(jià)。黃石鈣熒光成像光纖原理
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