膜片鉗技術(shù)與其他生物檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用:1.膜片鉗與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合應(yīng)用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術(shù)可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)成像研究,將膜片鉗技術(shù)與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合使用不但可以檢測(cè)細(xì)胞的電流變化情況,而且還可以對(duì)細(xì)胞的電信號(hào)傳遞活動(dòng)進(jìn)行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結(jié)合應(yīng)用:將膜片鉗和AFM結(jié)合使用的技術(shù)可以提高細(xì)胞電生理檢測(cè)的分辨率和靈敏度;而且,在獲得細(xì)胞電生理信息的同時(shí),還能獲取細(xì)胞的生物力學(xué)性質(zhì),從而更很全地研究細(xì)胞的生理功能。膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):禁止私拉電線,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。常州藥理學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.為了防止塵埃、靜電傷害機(jī)器,每天做實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時(shí),請(qǐng)先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關(guān)軟件,后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時(shí)請(qǐng)不要打開汞燈電源,打開后至少需1個(gè)小時(shí)才可關(guān)閉。6.在放大器打開時(shí)不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細(xì)胞片時(shí)請(qǐng)關(guān)閉放大器。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。金華全自動(dòng)膜片鉗服務(wù)膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性:大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞。
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時(shí),電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,Z適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實(shí)驗(yàn)。7.干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實(shí)驗(yàn)者請(qǐng)?jiān)贓盤建立自己的文件夾儲(chǔ)存數(shù)據(jù)。
膜片鉗操作實(shí)驗(yàn):膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性:在紀(jì)錄對(duì)象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞。
膜片鉗記錄的幾種形式:細(xì)胞吸附膜片(cell-attached patch) 將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,形成高阻封接,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制,高分辨測(cè)量膜電流,稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性,這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此,為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位,需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動(dòng)看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,所受的干擾小。膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性:胞體表面不規(guī)整,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場(chǎng)。南京藥理學(xué)膜片鉗
膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求。常州藥理學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商
膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。是用來研究單個(gè)離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用,也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求非常高,一般地,實(shí)驗(yàn)人員需要經(jīng)過嚴(yán)格的長(zhǎng)期的訓(xùn)練,才能準(zhǔn)確且快速的操作。膜片鉗技術(shù)是用于紀(jì)錄全細(xì)胞或個(gè)別細(xì)胞膜上離子信道電生理特性的研究方法常州藥理學(xué)膜片鉗成像供應(yīng)商