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多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場(chǎng)合下,熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng),卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩。所以胎牛血清不推薦熱滅活。熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗(yàn)中,通過(guò)加熱滅活掉血清中的補(bǔ)體,以避免對(duì)免疫試驗(yàn)的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導(dǎo)致胎牛血清中部分重要的生長(zhǎng)因子的活性衰減,進(jìn)而影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。寧波賽業(yè)血清哪里有
如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會(huì)自然消失。寧波賽業(yè)血清哪里有胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
很好的胎牛血清:免疫球蛋白,國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),結(jié)果也很不準(zhǔn)確,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出的時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進(jìn)口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。含量,此外,的使用也是要考慮在內(nèi)的。國(guó)內(nèi)外的血清,都不對(duì)進(jìn)行測(cè)試(無(wú)四環(huán)素胎牛血消除外)。其中,由于國(guó)外使用較為嚴(yán)格,用量有限,同時(shí)每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以追溯源頭,所以國(guó)外胎牛血清不含或者含量極低。但是國(guó)內(nèi)由于使用普遍,血清中殘留量很高,導(dǎo)致國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量很差,不利于細(xì)胞培養(yǎng)。
那么如何保障胎牛血清的品質(zhì)呢:內(nèi)有毒的,內(nèi)有毒的含量越低的血清,胎牛血清級(jí)別就越高:內(nèi)有毒的≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;10EU/ml<內(nèi)有毒的≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;內(nèi)有毒的≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;應(yīng)選取內(nèi)有毒的含量低的胎牛血清,使培養(yǎng)的細(xì)胞更健康。如果選取內(nèi)有毒的較高的血清,細(xì)胞一直泡在“毒液”里,短期內(nèi)細(xì)胞看不出太明顯的變化,但長(zhǎng)期的話細(xì)胞會(huì)衰老得較快,從而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成嚴(yán)重影響。微生物:微生物包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。嚴(yán)格的生產(chǎn)工藝可以對(duì)細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。同時(shí)3次0.1um過(guò)濾可以完全祛除支原體(支原體直徑0.2~0.3um)。通過(guò)病毒的檢測(cè),可以嚴(yán)格控制牛腹瀉、牛細(xì)小、藍(lán)舌病等病毒。通過(guò)非瘋牛病疫區(qū)生產(chǎn)還可避免朊病毒。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。
如何解凍血清?血清解凍需采用逐步解凍法:將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍,這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。需要對(duì)新買的血清進(jìn)行過(guò)濾嗎?血清在ISO13485認(rèn)證的廠房中生產(chǎn),經(jīng)過(guò)3次0.1μm過(guò)濾,出廠經(jīng)過(guò)檢測(cè)并且會(huì)使用三種以上的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)測(cè)試及無(wú)菌檢測(cè),污染幾率非常低。通常細(xì)胞污染有非常多的可能性,根據(jù)協(xié)助使用者進(jìn)行分析檢測(cè),結(jié)果表明絕大部分都是因人為操作失誤導(dǎo)致污染。因此買來(lái)的血清不需要再次進(jìn)行過(guò)濾。血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。寧波賽業(yè)血清哪里有
小牛血清取自出生10-30天的小牛。寧波賽業(yè)血清哪里有
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清指血漿除去纖維蛋白原后的膠狀液體。每100ml人血清含有蛋白質(zhì)6-8g,其中主要是白蛋白和球蛋白。血清不會(huì)凝固。有免疫,維持酸堿平衡和滲透壓的作用,血清蛋白質(zhì)亦可儲(chǔ)備供給機(jī)體蛋白質(zhì)不足時(shí)的應(yīng)用。人和動(dòng)物的血清常用以進(jìn)行各種血清學(xué)試驗(yàn),幫助診斷疾病。含抗體的血清可作為預(yù)防或醫(yī)治疾病之用。寧波賽業(yè)血清哪里有