我用的是3500g,4度離心,時間可以自己控制,取決于你之后的濃縮體積,我一般是200ul左右。千萬別一下離心時間太長,不同的蛋白濃縮的速度不同,有的需要長時間離心,有的則一下子就好。當然也和你的蛋白是否比較純,所用的是什么buffer,還有蛋白的濃度有關系。所以離心時要先短些時間觀察一下你的濃縮速度,不要一下子濃縮過了,甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實他們的管子都設計的是一次性使用,所以如果想重復使用,不要離得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重復使用時要看看管壁上有沒有裂紋,現在的管子好像不如從前的結實了。超濾離心管還可以用于濃縮樣品,減少其體積并提高濃度。蘇州濃縮超濾離心管生產商
超濾離心管使用注意事項:(1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。2)新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。(3)平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調至較低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法一時間處理。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。寧波10K超濾離心管工廠超濾離心管適用于從細胞培養(yǎng)基、血漿、尿液等樣品中分離蛋白質、核酸、多糖等大分子化合物。
一提起蛋白質濃縮、更換緩沖液,我們都會想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術。它可用來分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的較大特點是操作簡便,只需要濃縮離心管和離心機,即可圓滿完成我們的任務。與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和。它不需要有機萃取,就不會導致蛋白變性。這種方法非常高效,可同時濃縮和純化分子。操作可在低溫(比如冷庫)下進行。另外,快速、便宜,也是許多人青睞它的原因。濃縮離心管的操作很簡單。選擇適當的濃縮離心管,加入待處理的樣本,按照離心管的指示進行離心操作,之后回收截留的樣本。在離心力的作用下,溶液中的小分子溶質和溶劑透過超濾膜,被收集在濾過液收集瓶中,而大分子溶質被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據是分子大小,但分子形狀和電荷等其他因素也會有影響。
超濾作為一種膜分離技術,普遍應用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質則允許透過膜,從而達到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點是操作簡便、快速、高效,可同時濃縮和純化分子,一般來說超濾的回收率能夠達到90%以上,因此得到許多人的青睞。超濾濃縮器是一種可以為蛋白質樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準確結果的一次性超濾離心式過濾裝置,與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和,不需要有機萃取,不會導致蛋白變性,且簡單高效。潔特6mL規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL以內的樣本,離心管內包含一個內置豎直的聚醚砜(PES)膜過濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著、高通量的特點,可應用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD六種不同的截留分子量中。截留分子量標識和體積刻度蝕刻在濃縮器的側面便于識別。超濾離心管還可以用于提取DNA、RNA等核酸分子,并在基因工程和生物技術中發(fā)揮重要作用。
當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。超濾離心管也可用于水處理過程中去除污染物和雜質。青島外泌體超濾離心管
超濾離心管還可用于檢測水中的微生物、化學物質等,并進行環(huán)境監(jiān)測和控制。蘇州濃縮超濾離心管生產商
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經常購買離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬轉以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應,較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時不要在4℃以下。蘇州濃縮超濾離心管生產商