選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預(yù)冷至4度)。超濾離心管還可用于檢測藥品樣品中的殘留物和污染物,并進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測和控制。湖州蛋白分離離心管廠家電話
超濾離心管使用注意事項:當(dāng)濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。舟山3K超濾離心管購買超濾離心管還可用于分析食品樣品中的營養(yǎng)成分和添加劑,以保障公眾健康和安全。
脫鹽、更換緩沖液或滲濾是從含有生物分子的溶液中去除鹽分或溶劑的重要方法。鹽分去除或緩沖液更換可通過超濾管來完成,具體過程是濃縮樣本,棄去濾出液,然后向濃縮液中加入任何所需的溶劑,恢復(fù)到樣本原先的體積。"洗出"的過程可反復(fù)進(jìn)行,直到雜質(zhì)的濃度被充分降低。關(guān)于超濾管的常見問題與解答:Q:超濾管的膜材質(zhì)是什么?A:超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而準(zhǔn), 蛋白吸附損失小。Q:如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個蛋白的大小需要相差多少?A:按照經(jīng)驗,建議兩個蛋白的分子量要相差 一個數(shù)量級(10倍)。
A(聚酰胺):這種材質(zhì)是PP和PE材質(zhì)的聚合物,半透明,化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定,單不耐高溫。PF(聚氟):半透明,可以低溫使用,如果是-100℃-140℃下的實驗環(huán)境,就可以用這種材質(zhì)的離心管。CAB(醋酸丁酯纖維素):透明,可用于較稀的酸、堿、鹽,以及酒精、蔗糖的梯度測定。PS(聚苯乙烯):透明,硬度大,對大多數(shù)的水溶液穩(wěn)定,但是會被多種有機物腐蝕,多用于低速離心,而且一般是一次性使用。離心管分類:按材質(zhì)可分:塑料離心管、玻璃離心管和不銹鋼離心管等。按速度可分:低速離心管和高速離心管。按容量可分:微量離心管、小容量離心管和大容量離心管。一般稱容量大于100mL的離心管為離心瓶。使用超濾離心管時要注意控制轉(zhuǎn)速,以避免過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致超濾膜損壞或溢出樣品。
超濾離心管關(guān)于回收率的疑問?一般對濃度大于0.1mg/ml的溶質(zhì)進(jìn)行回收,回收率在90%以上。通常,樣品損失是由于濾膜表面和料管表面的非特異性吸附造成的。為了獲得較高的回收率,所選濾膜的截留率約為目標(biāo)蛋白的1/3。超濾膜是一種非對稱膜,其孔徑呈正態(tài)分布。在高壓離心下也可能發(fā)生泄漏,在這種情況下蛋白質(zhì)可能會發(fā)生變形。因此,截留孔徑越小,流速越慢,但回收率會更高。濃縮過程中有蛋白質(zhì)沉淀,如何處理?如果蛋白質(zhì)濃縮過快或過多,都可能造成蛋白質(zhì)沉淀,濃縮后的蛋白質(zhì)之后濃度不宜過高;對于對濃縮速度敏感、易沉淀的蛋白質(zhì),建議改進(jìn)方法如下:1)降低離心速度,2)使用截留分子量較大的超濾膜3) 吹吸濃縮管,然后離心。使用超濾離心管時應(yīng)注意保持其穩(wěn)定性并避免操作失誤導(dǎo)致實驗失敗或損壞設(shè)備。金華離心管定做
超濾離心管在基礎(chǔ)科學(xué)研究中也具有重要意義,如蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析、酵母遺傳學(xué)等領(lǐng)域。湖州蛋白分離離心管廠家電話
蛋白和多肽超濾離心管,垂直設(shè)計和有效的膜表面積提供了快速的樣品處理,較高的樣品回收率(> 90% 的樣品回收率),以及 80~100 倍濃縮的能力。濃縮物使用吸液器從過濾裝置中收集,而超濾液則在提供的離心管中收集。超濾離心管是一種可以為蛋白質(zhì)樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準(zhǔn)確結(jié)果的一次性超濾離心式過濾裝置,與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和,不需要有機萃取,不會導(dǎo)致蛋白變性,且簡單高效。規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL 以內(nèi)的樣本,離心管內(nèi)包含一個內(nèi)置豎直的聚醚砜(PES)膜過濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著、高通量的特點,可應(yīng)用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD 六種不同的截留分子量中。截留分子量標(biāo)識和體積刻度蝕刻在濃縮器的側(cè)面便于識別。湖州蛋白分離離心管廠家電話