湖北免疫沉淀CoIP WB檢測

免疫共沉淀與免疫沉淀技術(shù)所使用的原理與方法大致相似，所不同的是，在免疫共沉淀中，對靶蛋白的結(jié)合與沉淀由另一個(gè)與之發(fā)生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基礎(chǔ)上，通過進(jìn)一步與其它技術(shù)的結(jié)合，如聚丙烯酰胺凝膠電泳，還可進(jìn)一步對靶蛋白的的分子量等特性進(jìn)行鑒定。

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應(yīng)，對某個(gè)特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的擴(kuò)展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結(jié)合，此時(shí)如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會一同被拉下來，隨后利用SDS-PAGE，WesternBlot等方法對得到的目標(biāo)蛋白進(jìn)行分析，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。

Co-IP內(nèi)源檢測需注意抗體選擇、實(shí)驗(yàn)條件、樣本處理及驗(yàn)證，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠！湖北免疫沉淀CoIP WB檢測

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技術(shù)的缺點(diǎn)主要包括以下幾個(gè)方面：抗體特異性要求：IP-WB技術(shù)對抗體的特異性要求極高。如果抗體特異性不強(qiáng)，可能會導(dǎo)致非特異性結(jié)合，增加背景噪聲，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。低豐度蛋白檢測難度：由于IP-WB技術(shù)的靈敏度限制，對于低豐度的蛋白質(zhì)相互作用，可能難以檢測到。操作復(fù)雜性：IP-WB技術(shù)涉及多個(gè)步驟，包括樣品制備、免疫沉淀、電泳分離和Western Blot檢測等，操作相對復(fù)雜，需要一定的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和技能。結(jié)果解讀難度：Western Blot結(jié)果可能受到多種因素的影響，如蛋白表達(dá)水平、抗體親和力等，結(jié)果解讀可能具有一定的難度。雖然IP-WB技術(shù)存在一些缺點(diǎn)，但通過選擇特異性強(qiáng)的抗體、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件、提高實(shí)驗(yàn)技能等方法，可以很大程度地減少這些缺點(diǎn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。湖北免疫沉淀CoIP WB檢測Co-IP技術(shù)可靠，但需注意潛在限制與影響因素，綜合驗(yàn)證確保準(zhǔn)確性！

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點(diǎn)：

互作蛋白篩選和驗(yàn)證：數(shù)據(jù)分析以非標(biāo)定量信號強(qiáng)度（LFQintensity和FC>10）作為強(qiáng)陽篩選，以文獻(xiàn)查閱，功能匹配，批量CoIP-WB驗(yàn)證，提高驗(yàn)證成功率。理想CoIP-MS結(jié)果的蛋白定量都到超過1000種蛋白。其中絕大部分蛋白為非特異結(jié)合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信號強(qiáng)度和差異倍數(shù)作為參考（相對強(qiáng)信號和差異），分析實(shí)驗(yàn)組中明顯定量較高且差異較大的蛋白，作為重要候選蛋白。同時(shí)對重要候選蛋白進(jìn)行STRING互作分析，文獻(xiàn)分析，目的蛋白功能匹配分析，選擇Top的4-5個(gè)蛋白進(jìn)行CoIP-WB驗(yàn)證，提高CoIP-WB成功率。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）實(shí)驗(yàn)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用范圍。以下是其主要的應(yīng)用領(lǐng)域：1.蛋白質(zhì)相互作用研究（檢測蛋白質(zhì)相互作用/確定蛋白質(zhì)復(fù)合物的成員）；2.細(xì)胞信號傳導(dǎo)研究；3.蛋白質(zhì)功能和結(jié)構(gòu)研究；4.疾病機(jī)制研究；5.其他應(yīng)用：蛋白純化，蛋白質(zhì)翻譯后修飾研究。綜上所述，免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)在蛋白質(zhì)相互作用研究、細(xì)胞信號傳導(dǎo)研究、蛋白質(zhì)功能和結(jié)構(gòu)研究以及疾病機(jī)制研究等多個(gè)領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。Co-IP揭示蛋白互作，驗(yàn)證復(fù)合物形成，探究信號通路，助力蛋白研究！

CoIP-Mass應(yīng)用場景：CoIP-Mass：用于構(gòu)建目的蛋白的蛋白互作組數(shù)據(jù)，或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作組差異。CoIP-WB：用于驗(yàn)證目的蛋白和候選蛋白的相互作用關(guān)系，或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作變化。

CoIP-Mass和CoIP-WB技術(shù)價(jià)值：（1）蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)是機(jī)制研究的重要基礎(chǔ)內(nèi)容，體現(xiàn)機(jī)制研究的嚴(yán)謹(jǐn)性，能明顯提高臨床基礎(chǔ)類研究文章的檔次。（2）細(xì)胞內(nèi)蛋白互作處于動態(tài)變化過程，在不同條件下可發(fā)生動態(tài)變化，蛋白動態(tài)互作組檢測，是蛋白互作機(jī)制的亮點(diǎn)。（3）蛋白互作，往往是結(jié)構(gòu)域或部分關(guān)鍵區(qū)段的互作，可通過蛋白區(qū)段拆分，進(jìn)一步明確互作的結(jié)構(gòu)域，提升機(jī)制研究的高度，為靶點(diǎn)轉(zhuǎn)化提供關(guān)鍵切入點(diǎn)。 Co-IP高特異靈敏，適用多樣本，兼容質(zhì)譜，操作簡便，優(yōu)勢大！陜西免疫共沉淀檢測CoIP

Co-IP技術(shù)簡便、特異、靈敏，是探索蛋白質(zhì)相互作用和疾病機(jī)制的重要工具！湖北免疫沉淀CoIP WB檢測

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點(diǎn)：

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：盡量進(jìn)行試驗(yàn)組別設(shè)計(jì)和進(jìn)行生物學(xué)重復(fù)檢測，提高后續(xù)驗(yàn)證的陽性率。常規(guī)過表達(dá)單組（AbIPvsIgGIP）；動態(tài)互作組學(xué)（實(shí)驗(yàn)組vs對照組vsIg組）。根據(jù)目的設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)纳飳W(xué)重復(fù)。如果后續(xù)以CoIP-Mass數(shù)據(jù)進(jìn)行互作組標(biāo)準(zhǔn)分析，則需要3-4組生物學(xué)重復(fù)；如果后續(xù)以尋找關(guān)鍵互作蛋白，進(jìn)行機(jī)制深入研究，則建議1-2次生物學(xué)重復(fù)。經(jīng)驗(yàn)顯示單次重復(fù)假陽性率90%。

蛋白表達(dá)和細(xì)胞量：細(xì)胞用量要求大(2-10e7細(xì)胞量），建議不少于5e7（金標(biāo)準(zhǔn)：320g離心細(xì)胞量50μl，保障項(xiàng)目用量）。低表達(dá)蛋白，建議使用過表達(dá)組進(jìn)行檢測。蛋白表達(dá)可根據(jù)WB結(jié)果或初步根據(jù)數(shù)據(jù)庫判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 湖北免疫沉淀CoIP WB檢測