江蘇N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

Genovis的GlycOCATCH?是一種親和樹脂，可特異性結(jié)合O-糖基化（粘蛋白型）蛋白和肽，從而實(shí)現(xiàn)簡單的工作流程，以富集和純化攜帶O-聚糖的蛋白質(zhì)和肽。洗滌離心柱，并用8M尿素洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。對洗脫材料的分析表明，由于洗脫O-糖基化蛋白，并且樹脂與非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的結(jié)合可以忽略不計。選擇性結(jié)合 O-糖蛋白：為了測試選擇性，將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。為了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特異性，將O-glcyosyled肽（糖蛋白）與一系列未修飾的肽混合。N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)zhong共翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上；江蘇N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協(xié)同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點(diǎn)的覆蓋率（圖3）。使用OpeRATOR鑒定對應(yīng)于所有13個O-聚糖位點(diǎn)的肽，而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點(diǎn)。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好，此處由 S186 和 T245 位點(diǎn)缺乏消化來表明。此外，ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解，如 S213 位點(diǎn)酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點(diǎn)酶解肽的低強(qiáng)度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品（T184-S199和T200-H204;圖2b和d），而在ImpaRATOR消化的樣品中，具有漏裂的相應(yīng)肽（S184-H204）的強(qiáng)度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點(diǎn)覆蓋率，但使用ImpaRATOR進(jìn)行消化可以表征O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化物種。例如，條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應(yīng)該與使用OpeRATOR的消化進(jìn)行比較，在OpeRATOR中，必須去除唾液酸才能產(chǎn)生酶活性，這意味著有關(guān)唾液酸化的信息丟失?？偠灾?，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關(guān)聚糖組成和 O-聚糖位點(diǎn)的完整信息。北京N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)在天然條件下用固定化PNGase F去除zhiliao性抗體；

水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR色譜柱只能在天然條件下使用的原因。 OmniGLYZOR 試劑盒 Microspin 以含有足夠材料的試劑盒形式提供，可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-連接聚糖的快速高效；與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)基礎(chǔ)蛋白的分析；固定形式可提高酶與底物的比率，從而實(shí)現(xiàn)快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶分別購自Genovis(馬薩諸塞州，美國)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的凍干酶。Genovis的PNGase F 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。

用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達(dá)，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。ImpaRATOR 酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關(guān)法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等，致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù)，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度，為客戶提供更多價值。IgA 特異性O(shè)-糖肽富集：胰蛋白酶消化IgA。北京N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。江蘇N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

我們測量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖，對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活Genovis的FucosEXO的底物特異性：巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見于 O-聚糖中，并作為 N-聚糖的天線巖藻糖基化，而 α1-6 連接的巖藻糖被發(fā)現(xiàn)是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。江蘇N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)