河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

FucosEXO中的酶在大腸桿菌中表達，帶有His標簽，分子量為87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然條件下水解糖蛋白上的巖藻糖，在6至8的pH值范圍內(nèi)顯示出高活性，無需輔助因子或添加劑。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集：GlycOCATCH還可用于從復雜的樣品混合物（如人血清）中選擇性富集O-糖基化蛋白。簡而言之，用Genovis的SialEXO處理血清并應用于GlycOCATCH樹脂。洗滌樹脂，用8M尿素洗脫O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化樣品并使用 RP-LC-MS/MS 進行分析，并使用 Swiss Prot 數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質列表。O-糖基化蛋白以黃色表示。依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性，形成了重疊的肽，從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較，相同材料的標準胰蛋白酶消化物， 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位：OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽，并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。

用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。

Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結構分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖；2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心；3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。

當在完整狀態(tài)下進行分析時，EPO的聚糖異質性導致了非常復雜的質譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如對應于未修飾蛋白質的單個峰所示。EPO上殘留了少量用乙?；僖核嵝揎椀腛-聚糖，因為OmniGLYZOR對這種結構的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議（在37°C下進行O/N孵育），兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理，并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面，N-聚糖在內(nèi)質網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質上。這導致某些 N-糖基化位點難以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài)，就根本無法接近。因此，這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。固定形式可提高酶與底物的比率，快速去糖基化。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

用SialEXO對依那西普糖蛋白去唾液酸化，并用ProteinSimple成像等電聚焦分析。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

生成攜帶 O-糖的糖肽，該酶可實現(xiàn) O-糖譜分析、O-糖肽圖譜和位點占用測定，以及使用 MS 分析的中級方法。1.可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點的 N 末端；2.穩(wěn)健的消化，增強復雜生物制藥的表征；3.高特異性 - 可靠的聚糖位點測定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化攜帶he心1 O-聚糖的蛋白質，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 殘基的 N 端。OpeRATOR 來源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表達。大腸桿菌。該酶含有 His 標簽，分子量為 42 kDa。SialEXO 來源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表達。大腸桿菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 標簽，這些組分的分子量分別為 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的凍干酶。Genovis的OpeRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)