四川FabALACTICAIdeS蛋白酶

與IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點(diǎn)是人IgG1三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會(huì)出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性，并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑（2mM半胱氨酸）與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物，研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng)，并鑒定翻譯后修飾。瑞典生物技術(shù)公司Genovis提供IdeS蛋白酶等，用于mAb、ADC藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。四川FabALACTICAIdeS蛋白酶

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1和IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長(zhǎng)，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點(diǎn)的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時(shí)間為過夜（16-18小時(shí)），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值為6.0至8.0時(shí)具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產(chǎn)生活性?；钚詾?7°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。上海GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)FabRICATOR（IdeS蛋白酶）的一大優(yōu)勢(shì)是速度！

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學(xué)家的經(jīng)驗(yàn)，尤其是對(duì)于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中做了太多的肽圖譜，而中級(jí)水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級(jí)方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實(shí)際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯(cuò)的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺(tái)方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個(gè)樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設(shè)置和數(shù)據(jù)分析的每個(gè)不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡(jiǎn)單性，中級(jí)方法非常適合自動(dòng)化和高通量的工作流程。肽圖當(dāng)然可以自動(dòng)用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實(shí)上，肽圖譜是一個(gè)多步驟的過程，每一個(gè)步驟都可能破壞方法，并可能導(dǎo)致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓(xùn)練給非專業(yè)人員。中級(jí)水平的方法很容易交叉訓(xùn)練，我們的方法在質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認(rèn)的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級(jí)分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細(xì)表征和監(jiān)測(cè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性，例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品通常通過液相色譜質(zhì)譜 （LC-MS） 進(jìn)行分析。然而，在LC-MS之前進(jìn)行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn)，Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性瓊脂糖珠上，現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上，可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，促進(jìn)中級(jí)表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實(shí)驗(yàn)和操作時(shí)間，降低樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)提高通量。半胱氨酸蛋白酶，可在來自多個(gè)不同物種和亞類的 IgG 的鉸鏈區(qū)域消化，產(chǎn)生 Fab 和 Fc 片段。

與IdeS不同，Genovis的GlySERIAS是一種獨(dú)特的酶，可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如Gly4Ser和GlyxSery（GS）以及聚甘氨酸（G）接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域，以促進(jìn)表征并增加對(duì)這些分子的理解。融合蛋白的中級(jí)分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性，又可以對(duì)翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測(cè)。為了改善連接子的去除，Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對(duì)于連接子表征，我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨(dú)特酶消化融合蛋白；中級(jí)方法可降低融合蛋白表征的復(fù)雜性；復(fù)雜融合蛋白的可靠且可重復(fù)的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復(fù)序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性，能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進(jìn)行中級(jí)表征。連接子區(qū)域同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)被消化，導(dǎo)致先前連接的組分分離?；钚园l(fā)生在pH7.6下，孵育時(shí)間可以根據(jù)所需的產(chǎn)物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為18kDa。Genovis的IdeS蛋白酶是IgG特異性半胱氨酸蛋白酶。GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

獲得完整Fab和Fc抗體片段，用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) （HOS） 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。四川FabALACTICAIdeS蛋白酶

LC-MS中級(jí)分析是一種被大眾接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關(guān)鍵質(zhì)量屬性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關(guān)于翻譯后修飾（PTM）的詳細(xì)知識(shí)是生物制藥開發(fā)和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱，可快速進(jìn)行單克隆抗體的柱上酶切，并產(chǎn)生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc片段，而不會(huì)出現(xiàn)任何過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動(dòng)化解決方案，F(xiàn)abRICATOR被共價(jià)固定在樹脂上，并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱，只需稍作修改，即可使用標(biāo)準(zhǔn)HPLC-MS裝置自動(dòng)生成抗體亞基。然后，F(xiàn)abRICATOR HPLC色譜柱上消解產(chǎn)生的亞基被捕獲在在線連接的反相（RP）色譜柱的柱頭上。四川FabALACTICAIdeS蛋白酶