江西GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA，因為它會影響療效、和免疫原性。因此，需要從早期開發(fā)、工藝開發(fā)到質(zhì)量控制和批量放行的整個過程對Fc聚糖譜進行監(jiān)測。傳統(tǒng)的分析方法基于對游離的聚糖進行熒光標記，然后通過HILIC-HPLC或CE進行分析，這需要多步驟的樣品制備方案，這需要大量的時間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，然后使用LC-MS進行中級分析，為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示，它很容易實現(xiàn)自動化，以提高通量并降低處理錯誤的風險。Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，使用LC-MS進行中級分析。江西GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監(jiān)測關鍵質(zhì)量屬性，例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發(fā)和穩(wěn)定性研究相關的大量樣品通常通過液相色譜質(zhì)譜 （LC-MS） 進行分析。然而，在LC-MS之前進行足夠規(guī)模的樣品制備通常具有挑戰(zhàn)性。為了解決樣品制備的挑戰(zhàn)，Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性瓊脂糖珠上，現(xiàn)在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上，可同時快速自動消化多種抗體，促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間，降低樣品處理錯誤的風險，同時提高通量。四川FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并明顯簡化IgA分析表征的寶貴工具。

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì)，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。

與IdeS不同，Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 （TPO） 受體結(jié)合肽和一個 Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似，用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2，剩下一個連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2，剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產(chǎn)生 2 個 Fc/2 變體，分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據(jù)消化時間的不同，使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同，而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。為了降低度拉糖肽復雜性，使用GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。為了分別研究度拉糖肽的肽和 Fc 區(qū)域，用GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化1 小時。江西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis 酶產(chǎn)品，被世界各地的科學家使用，創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。江西GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學家的經(jīng)驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設置和數(shù)據(jù)分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓練給非專業(yè)人員。中級水平的方法很容易交叉訓練，我們的方法在質(zhì)量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。江西GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學