單細(xì)胞測(cè)序是什么?單細(xì)胞測(cè)序是基于高通量測(cè)序(Next-generationsequencingtechnology,NGS)方法,檢測(cè)群體中單細(xì)胞基因組、單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組、單細(xì)胞表觀基因組及單細(xì)胞蛋白組,提供細(xì)胞間差異的高分辨率視圖,從分子水平揭示細(xì)胞奧秘。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(Single-cellRNA-Sequencing,ScRNA-Seq)指在單細(xì)胞水平上對(duì)mRNA進(jìn)行高通量測(cè)序和分析的技術(shù)。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序能獲得單個(gè)細(xì)胞內(nèi)近萬個(gè)基因的表達(dá)信息,為辨別生物組織中各種細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)錄組特征和全方面揭示細(xì)胞之間基因表達(dá)的異質(zhì)性提供了有力的工具[3]。說到細(xì)胞異質(zhì)性(Cellheterogeneity),就要說到我們?yōu)槭裁匆脝渭?xì)胞測(cè)序技術(shù)了。寄送 RNA 樣品請(qǐng)置于 1.5 ml 離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間,管口使用 Parafilm 封口。上海微生物高通量測(cè)序平臺(tái)
使用顯微鏡進(jìn)行懸液質(zhì)檢操作時(shí)應(yīng)注意:1.使用血球計(jì)數(shù)板時(shí),可以提前鏡檢觀察每小格計(jì)數(shù)室內(nèi)是否潔凈無雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層,則需要多次清洗,直至計(jì)數(shù)室潔凈無瑕;2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴(kuò)口***頭吹打混勻;3.臺(tái)盼藍(lán)染色后需要盡快完成細(xì)胞計(jì)數(shù),一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細(xì)胞數(shù)目過多,難以數(shù)清,應(yīng)當(dāng)對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋以便于計(jì)數(shù);5.對(duì)于壓在方格界線上的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細(xì)胞數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計(jì)數(shù)。上海SNP高通量測(cè)序服務(wù)關(guān)鍵是KBSeq還可以省錢。
樣本寄送時(shí),請(qǐng)將填寫完整的紙質(zhì)版《高通量測(cè)序送樣表》密封于塑料袋內(nèi),隨樣本一起寄出,紙質(zhì)版的樣本信息單用于樣本接收人員在收到樣本后及時(shí)并正確的保存并錄入樣本,如無紙質(zhì)版的樣本信息單可能會(huì)延誤項(xiàng)目周期;樣本管壁或管蓋上標(biāo)明的樣本名稱需要與《高通量測(cè)序送樣表》里樣本名稱一致,這樣可以避免我們收到樣本后與您確認(rèn)樣本編號(hào)而耽誤樣本質(zhì)檢、提取實(shí)驗(yàn);如有特殊情況,請(qǐng)?jiān)凇陡咄繙y(cè)序送樣表》中注明;樣品編號(hào)請(qǐng)避免使用中文、羅馬數(shù)字、“-”以及特殊符號(hào)標(biāo)示,避免分析的時(shí)候系統(tǒng)無法識(shí)別,導(dǎo)致分析無法完成;我們分析人員建議編號(hào)可以采用英文字母與阿拉伯?dāng)?shù)字結(jié)合的形式,字符比較好不要過長(zhǎng),避免繪制部分分析圖的時(shí)候難以全部展示。
全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(Total RNA-Seq),項(xiàng)目介紹:全轉(zhuǎn)錄組是指特定細(xì)胞在特定狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA(non-coding RNA)。針對(duì)非編碼RNA的研究主要集中在具有調(diào)控作用的miRNA,lncRNA和circRNA?;诙鷾y(cè)序技術(shù)的全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究,同時(shí)分析同一樣本中的mRNA,lncRNA,circRNA和miRNA,并且通過關(guān)聯(lián)分析,使研究?jī)?nèi)容更加系統(tǒng)化,致力于深入挖掘生命現(xiàn)象背后的轉(zhuǎn)錄調(diào)控問題。組織樣品或者總 RNA, 樣品名稱清晰,干冰運(yùn)輸。在運(yùn)輸前將所有樣品管固定于50 ml帶蓋離心管中,再將50 ml管放在封口袋中。
IlluminaHiSeq2500/4000可以運(yùn)行PE150/PE250模式,可以承擔(dān)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、人基因組重測(cè)序、外顯子捕獲測(cè)序、宏基因組測(cè)序、微生物分類測(cè)序等服務(wù);IlluminaMiSeq運(yùn)行PE300模式,可以承擔(dān)細(xì)菌基因組重測(cè)序/Denovo測(cè)序、微生物分類測(cè)序、擴(kuò)增子測(cè)序、核酸適配體測(cè)序等服務(wù);LifeIontorrentPGM運(yùn)行314、316、318芯片,可以承接擴(kuò)增子測(cè)序、靶區(qū)域測(cè)序、基因組重測(cè)序服務(wù);PacBioSequel/RSII該測(cè)序平臺(tái)讀長(zhǎng)超長(zhǎng),平均可達(dá)10kb以上,主要承接細(xì)菌基因組完成圖測(cè)序、***基因組精細(xì)圖測(cè)序、全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本測(cè)序等服務(wù);近年來,隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展和普及,單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)發(fā)展十分迅速。上海市宏全基因組高通量測(cè)序NGS
DNA樣品建議用藍(lán)冰運(yùn)輸。上海微生物高通量測(cè)序平臺(tái)
為什么要用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)?細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,在生物體生長(zhǎng)發(fā)育的過程中,因細(xì)胞類型、外界環(huán)境以及內(nèi)部調(diào)節(jié)因素的不同,其轉(zhuǎn)錄組信息也不盡相同。由于基因組和表觀遺傳的重編程,以及在細(xì)胞分裂和分化過程中出現(xiàn)的誤差造成來自同一細(xì)胞系或個(gè)體的細(xì)胞呈現(xiàn)出不同的基因組、轉(zhuǎn)錄組和表觀基因組[4]。這就是我們上面提到的細(xì)胞異質(zhì)性。細(xì)胞異質(zhì)性是生物組織和生物系統(tǒng)的普遍特征[5]。但是我們常規(guī)的二代測(cè)序檢測(cè)的是一個(gè)細(xì)胞群體的基因組、轉(zhuǎn)錄組的信息,如培養(yǎng)的大量細(xì)胞、動(dòng)植物組織甚至是整個(gè)生物體。在過去的20多年中,人們對(duì)轉(zhuǎn)錄組的人數(shù)仍然局限在群體水平[6]。這種方法可以為我們提供大量的基因組或轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),卻無法揭示細(xì)胞的異質(zhì)性。傳統(tǒng)方法得到的是細(xì)胞群的平均基因組,而單細(xì)胞測(cè)序測(cè)量的是細(xì)胞群中單個(gè)細(xì)胞的基因組[7]?,F(xiàn)在也有學(xué)者為了區(qū)分傳統(tǒng)測(cè)序和單細(xì)胞測(cè)序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱為批量測(cè)序。上海微生物高通量測(cè)序平臺(tái)
生工生物工程(上海)股份有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn),在發(fā)展過程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評(píng)價(jià),這些都源自于自身不努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,這些評(píng)價(jià)對(duì)我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力,也促使我們?cè)谝院蟮牡缆飞媳3謯^發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同生工生物工程供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來,創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長(zhǎng)!