上海市靶向捕獲高通量測(cè)序公司

單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序技術(shù)可以檢測(cè)復(fù)雜組織中單個(gè)細(xì)胞不同的生物學(xué)特性，這可以極大的幫助我們進(jìn)一步了解細(xì)胞與細(xì)胞之間的差異。"這幾乎就像通過幾顆星星看到了整個(gè)宇宙。"哈佛大學(xué)分子和細(xì)胞生物學(xué)教授 Alexander Schier的這句話應(yīng)用在這里也是很合適了。這幅圖正是來自于在2018年4月 Science 雜志發(fā)表的三篇[8-10]來自哈佛醫(yī)學(xué)院和哈佛大學(xué)的研究人員關(guān)于單細(xì)胞基因測(cè)序文章中的一幅結(jié)果圖，Alexander Schier教授也是其中一篇文章的作者。這幾篇文章使用多種檢測(cè)技術(shù)組合，其中包括對(duì)數(shù)千個(gè)發(fā)育中的斑馬魚和青蛙胚胎單細(xì)胞測(cè)序，在胚胎發(fā)育建議初的24小時(shí)內(nèi)追蹤單個(gè)細(xì)胞的發(fā)育情況，可以揭示出胚胎細(xì)胞何時(shí)何地轉(zhuǎn)變?yōu)樾碌募?xì)胞狀態(tài)和類型并向我們展示了組織和整個(gè)機(jī)體從單細(xì)胞發(fā)育的完整歷程。生工生物接受客戶自備文庫測(cè)序項(xiàng)目。上海市靶向捕獲高通量測(cè)序公司

臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。

通過顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果：明場(chǎng)（細(xì)胞未染色）：主要可以觀察懸液背景質(zhì)量（背景干凈，無雜質(zhì)碎片，無細(xì)胞團(tuán)塊）；臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)（細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染色后）：主要可以觀察活性（主要為活細(xì)胞，未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞）；通過臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)計(jì)算活率：90%>80%；細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看，血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)，屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。 上海多重PCR高通量測(cè)序高通量X儀器本身有16個(gè)通道（Controller為8通道），每個(gè)通道極限多捕獲20000個(gè)細(xì)胞（Controller為10000個(gè)細(xì)胞） 。

生工CHIP-Seq，項(xiàng)目介紹：CHIP-SEQ 技術(shù)，即染色質(zhì)免疫共沉淀與高通量測(cè)序相結(jié)合的技術(shù)。它是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA 相互作用的有力工具，還可以用來研究轉(zhuǎn)錄因子與基因表達(dá)的關(guān)系。通過高通量測(cè)序，可以一次性得到目的蛋白在整個(gè)基因組上的結(jié)合分布，得到目的蛋白精確的結(jié)合位點(diǎn)以及結(jié)合基序等信息。ChIP-Seq 的原理：首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP）特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA 的所屬片段，并對(duì)其進(jìn)行純化與文庫構(gòu)建；然后對(duì)富集得到的DNA的片段進(jìn)行高通量測(cè)序，將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上，從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA 區(qū)段信息。

生工高通量測(cè)序樣品要求，RNA樣品：請(qǐng)?zhí)峁舛取?50 ng/μl、總量≥2μg的總RNA樣品，樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行DNase處理;請(qǐng)務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來源。比較好附上QC數(shù)據(jù)，可以是電泳膠圖、分光光度值、Nanodrop儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)或者Agilent Bioanalyzer儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)等;一般情況下，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要Agilent Bioanalyzer儀器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1，RIN≥7;小RNA測(cè)測(cè)序不可采用常規(guī)柱式總RNA提取試劑盒，可選擇傳統(tǒng)總RNA提取法（如乙醇沉淀、異丙醇沉淀等）或者選用專門的小RNA提取試劑盒;寄送RNA樣品請(qǐng)置于1.5 ml離心管中，管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間，管口使用Parafilm封口。在運(yùn)輸前將所有樣品管固定于50 ml帶蓋離心管中，再將50 ml管放在封口袋中。使用足量的干冰運(yùn)輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運(yùn)輸過程中樣品降解的可能性。近年來，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展和普及，單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)發(fā)展十分迅速。

懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢？單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求：?細(xì)胞濃度：700-1200cells/μl；?細(xì)胞活率>80%（當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時(shí)建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理）；細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%（無細(xì)胞粘連，無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并保證細(xì)胞的完整性）；?細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞直徑在7-40um之間（細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。生工高通量測(cè)序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn)，日均處理樣品200余例。上海地區(qū)全質(zhì)粒測(cè)序高通量測(cè)序平臺(tái)

單細(xì)胞測(cè)序到底是什么？上海市靶向捕獲高通量測(cè)序公司

使用顯微鏡進(jìn)行懸液質(zhì)檢操作時(shí)應(yīng)注意：1.使用血球計(jì)數(shù)板時(shí)，可以提前鏡檢觀察每小格計(jì)數(shù)室內(nèi)是否潔凈無雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層，則需要多次清洗，直至計(jì)數(shù)室潔凈無瑕；2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴(kuò)口gun頭吹打混勻；3.臺(tái)盼藍(lán)染色后需要盡快完成細(xì)胞計(jì)數(shù)，一般建議不要超過10分鐘；4.如果方格中細(xì)胞數(shù)目過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋以便于計(jì)數(shù)；5.對(duì)于壓在方格界線上的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細(xì)胞數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計(jì)數(shù)。上海市靶向捕獲高通量測(cè)序公司

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