單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序技術(shù)可以檢測(cè)復(fù)雜組織中單個(gè)細(xì)胞不同的生物學(xué)特性，這可以極大的幫助我們進(jìn)一步了解細(xì)胞與細(xì)胞之間的差異。"這幾乎就像通過幾顆星星看到了整個(gè)宇宙。"哈佛大學(xué)分子和細(xì)胞生物學(xué)教授 Alexander Schier的這句話應(yīng)用在這里也是很合適了。這幅圖正是來自于在2018年4月 Science 雜志發(fā)表的三篇[8-10]來自哈佛醫(yī)學(xué)院和哈佛大學(xué)的研究人員關(guān)于單細(xì)胞基因測(cè)序文章中的一幅結(jié)果圖，Alexander Schier教授也是其中一篇文章的作者。這幾篇文章使用多種檢測(cè)技術(shù)組合，其中包括對(duì)數(shù)千個(gè)發(fā)育中的斑馬魚和青蛙胚胎單細(xì)胞測(cè)序，在胚胎發(fā)育建議初的24小時(shí)內(nèi)追蹤單個(gè)細(xì)胞的發(fā)育情況，可以揭示出胚胎細(xì)胞何時(shí)何地轉(zhuǎn)變?yōu)樾碌募?xì)胞狀態(tài)和類型并向我們展示了組織和整個(gè)機(jī)體從單細(xì)胞發(fā)育的完整歷程。X儀器本身有16個(gè)通道（Controller為8通道），每個(gè)通道極限多捕獲20000個(gè)細(xì)胞（Controller為10000個(gè)細(xì)胞） 。上海地區(qū)16s高通量測(cè)序
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中，制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液至關(guān)重要。而懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢？單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求：?細(xì)胞濃度：700-1200cells/μl；?細(xì)胞活率>80%（當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時(shí)建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理）；細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%（無細(xì)胞粘連，無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并保證細(xì)胞的完整性）；?細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞直徑在7-40um之間（細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。上海地區(qū)small RNA高通量測(cè)序應(yīng)用組織材料樣品（提取RNA用）建議將標(biāo)簽用膠帶貼到管壁，干冰運(yùn)輸。
RNA樣品：1.請(qǐng)務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來源。比較好附上電泳膠圖或者 Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)等；2.對(duì)于普通轉(zhuǎn)錄組樣品，請(qǐng)?zhí)峁舛取?00 ng/μl、總量≥2 μg 的總 RNA 樣品，樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase處理；一般情況下，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280為 2.0~2.2，Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1，RIN≥8；對(duì)于全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序樣品（ISO-seq）,請(qǐng)?zhí)峁舛却笥?00 ng/ul，總量大于5 μg的總RNA樣品。樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行 DNase 處理；全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2，2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1，RIN≥8.5；
單細(xì)胞懸液質(zhì)檢方法，在進(jìn)行單細(xì)胞懸液質(zhì)檢時(shí)，需要用到以下兩大質(zhì)檢利器的輔助：熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（主要使用臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色法）進(jìn)行質(zhì)檢。首先我們先要了解一下細(xì)胞質(zhì)檢時(shí)染料染色的原理：臺(tái)盼藍(lán)染色原理：臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)結(jié)果可以讓我們直觀的看到：細(xì)胞濃度（總細(xì)胞，活細(xì)胞，死細(xì)胞）、細(xì)胞存活率（臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色）、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。單細(xì)胞測(cè)序到底是什么？
樣本寄送時(shí)，請(qǐng)將填寫完整的紙質(zhì)版《高通量測(cè)序送樣表》密封于塑料袋內(nèi)，隨樣本一起寄出，紙質(zhì)版的樣本信息單用于樣本接收人員在收到樣本后及時(shí)并正確的保存并錄入樣本，如無紙質(zhì)版的樣本信息單可能會(huì)延誤項(xiàng)目周期；樣本管壁或管蓋上標(biāo)明的樣本名稱需要與《高通量測(cè)序送樣表》里樣本名稱一致，這樣可以避免我們收到樣本后與您確認(rèn)樣本編號(hào)而耽誤樣本質(zhì)檢、提取實(shí)驗(yàn)；如有特殊情況，請(qǐng)?jiān)凇陡咄繙y(cè)序送樣表》中注明；樣品編號(hào)請(qǐng)避免使用中文、羅馬數(shù)字、“-”以及特殊符號(hào)標(biāo)示，避免分析的時(shí)候系統(tǒng)無法識(shí)別，導(dǎo)致分析無法完成；我們分析人員建議編號(hào)可以采用英文字母與阿拉伯?dāng)?shù)字結(jié)合的形式，字符比較好不要過長(zhǎng)，避免繪制部分分析圖的時(shí)候難以全部展示。為什么要用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)？small RNA高通量測(cè)序測(cè)序
生工高通量測(cè)序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn)，日均處理樣品200余例。上海地區(qū)16s高通量測(cè)序
2021年11月1日，在這個(gè)平凡而又特殊的日子里，生工生物高通量測(cè)序部迎來了一位新成員——10xGenomics Chromium X！不要看我們個(gè)頭小，我們可是百萬級(jí)單細(xì)胞捕獲神器吆。X是如何實(shí)現(xiàn)單次運(yùn)行有這么高的吞吐量呢？多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。X儀器本身有16個(gè)通道（Controller為8通道），每個(gè)通道比較多捕獲20000個(gè)細(xì)胞（Controller為10000個(gè)細(xì)胞）。再結(jié)合10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)，每個(gè)通道比較多可捕獲60,000個(gè)細(xì)胞，去除雙細(xì)胞率后，每張芯片比較多可捕獲750,000個(gè)單細(xì)胞。上海地區(qū)16s高通量測(cè)序
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