第二代測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用:第二代測(cè)序技術(shù)(NGS)因其快速和靈敏的檢測(cè)特點(diǎn)已成為植物病毒學(xué)研究的強(qiáng)有力工具,這一技術(shù)具有非序列依賴(lài)性的優(yōu)勢(shì),能同時(shí)檢測(cè)植物樣品中可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)的、含量高及含量低的所有的DNA病毒、RNA病毒以及類(lèi)病毒,它的出現(xiàn)極大地變革和推進(jìn)了病毒的發(fā)現(xiàn)歷程,近期來(lái)自浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所等處的研究人員圍繞NGS及其在植物病毒發(fā)掘中的應(yīng)用研究和前景進(jìn)行概述和展望。對(duì)分離培養(yǎng)和臨床標(biāo)本的病毒核酸的測(cè)序?qū)嶒?yàn)及分析流程?;跓o(wú)差別的樣本處理方式和獨(dú)特的生物信息學(xué)分析流程,除了對(duì)于被宿主核酸污染的病原微生物/病毒核酸樣本進(jìn)行全基因組和宏基因組測(cè)序之外,未知病原也在探普特有的流程下可以得以鑒別。通過(guò)對(duì)病毒全基因組高通量測(cè)序可以在較短時(shí)間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息,解釋病毒的來(lái)源。河南高通量測(cè)序分析診斷
二代測(cè)序可以用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序有哪些挑戰(zhàn)?二代測(cè)序相較sanger測(cè)序,差異主要就是單次運(yùn)行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量,因此也稱(chēng)為高通量測(cè)序。想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。而高通量測(cè)序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開(kāi)發(fā)的,因此每個(gè)環(huán)節(jié)都是挑戰(zhàn)。核酸純化步驟決定了Input核酸的起始濃度和總量,從而決定了文庫(kù)構(gòu)建的成敗、質(zhì)量和產(chǎn)量;文庫(kù)的好壞決定了數(shù)據(jù)的質(zhì)量和產(chǎn)出;而數(shù)據(jù)的質(zhì)量產(chǎn)出直接影響分析結(jié)果。樣品一般核酸濃度很低,且?guī)в写罅克拗魑廴?,因此?shí)驗(yàn)部分和分析部分都比較困難。探普生物基于這些困難點(diǎn),進(jìn)行了大量有針對(duì)性的研發(fā)和測(cè)試,開(kāi)發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序,該流程自運(yùn)行以來(lái)廣受研究者們好評(píng)。四川高通量測(cè)序服務(wù)病毒全基因組測(cè)序具有的特點(diǎn):專(zhuān)業(yè)化服務(wù)。
高通量基因組測(cè)序中,測(cè)序深度和覆蓋度指的是:測(cè)序深度是指測(cè)序得到的總堿基數(shù)與待測(cè)基因組大小的比值。假設(shè)一個(gè)基因大小為2M,測(cè)序深度為10X,那么獲得的總數(shù)據(jù)量為20M。覆蓋度是指測(cè)序獲得的序列占整個(gè)基因組的比例。由于基因組中的高GC、重復(fù)序列等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的存在,測(cè)序終拼接組裝獲得的序列往往無(wú)法覆蓋有所的區(qū)域,這部分沒(méi)有獲得的區(qū)域就稱(chēng)為。例如一個(gè)細(xì)菌基因組測(cè)序,覆蓋度是98%,那么還有2%的序列區(qū)域是沒(méi)有通過(guò)測(cè)序獲得的。
高通量測(cè)序技術(shù)具有的作用:高通量測(cè)序技術(shù)在冠狀病毒的鑒定中發(fā)揮了重要作用,先通過(guò)該技術(shù)確認(rèn)了該病原為以前未知的β冠狀病毒,其次確認(rèn)了該病毒與蝙蝠相關(guān)冠狀病毒ZC45和ZXC21密切相關(guān),同源性約為88%,后高通量測(cè)序?yàn)楹罄m(xù)的診斷提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。高通量測(cè)序能否定向檢測(cè)細(xì)菌病毒等微生物?例如某人有皮膚病,提取組織,能否通過(guò)高通量測(cè)序來(lái)檢測(cè)后列出所有的致病菌?;蛘弋?dāng)懷疑的時(shí)候,在人體組織中檢測(cè)是否有某種特定的細(xì)菌或者病毒。(不求原理),就是想知道現(xiàn)在的測(cè)序技術(shù)能否替代傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)方法。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)等方法,對(duì)樣本的全微生物檢測(cè),或者特定微生物檢測(cè),基因測(cè)序技術(shù)目前的時(shí)間消耗,準(zhǔn)確率,和金錢(qián)成本大概如何。可以定向檢測(cè),用特異引物就可以。對(duì)病毒全基因組進(jìn)行測(cè)序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列。
人類(lèi)的病毒性傳染很普遍,病毒可以通過(guò)呼吸道、消化道、皮膚等多種途徑進(jìn)行傳播,常常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題,對(duì)人類(lèi)的健康造成威脅。傳統(tǒng)的病毒檢測(cè)方法主要依賴(lài)于細(xì)胞培養(yǎng)法、抗原抗體結(jié)合法等,這些方法耗時(shí)久,靈敏度低,往往不能夠滿(mǎn)足臨床檢測(cè)需求。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,PCR方法用于病毒檢測(cè)的案例越來(lái)越多,但該方法的特異性限制了其同時(shí)檢測(cè)其它病毒的能力。因此,需要通過(guò)新的技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。隨著二代測(cè)序技術(shù)成本的降低與普及,二代測(cè)序在臨床病原體檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)也越加突顯。該技術(shù)基于二代測(cè)序平臺(tái),可以直接從樣本中獲得病原體的核酸序列信息,再通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)得到的序列進(jìn)行分析,可以快速地對(duì)樣本中可能存在的全部病原體進(jìn)行鑒定,縮短了臨床檢測(cè)的周期。測(cè)序的完成程度,決定著基因組的下游應(yīng)用。深度測(cè)序排行
病毒全基因組測(cè)序具有的特點(diǎn):獨(dú)有的一定定量技術(shù),實(shí)現(xiàn)病原定量分析。河南高通量測(cè)序分析診斷
新一代測(cè)序中基因從頭測(cè)序和重測(cè)序有什么區(qū)別?我要做乙肝病毒DNA全長(zhǎng)測(cè)序,應(yīng)該選用哪種方法?1、條件不同;從頭測(cè)序的條件是不依賴(lài)于任何物種基因組;重測(cè)序的條件是在已知物種基因組的情況下進(jìn)行的。2、病毒變異率不同;從頭測(cè)序是通過(guò)拼接和組裝的方式獲得基因組序列圖譜,病毒變異率很低;重測(cè)序可以尋找出大量的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),插入缺失位點(diǎn),結(jié)構(gòu)變異位點(diǎn),拷貝數(shù)變異等變異信息,從而獲得生物群體的遺傳特征。病毒變異率很高。乙肝病毒在醫(yī)學(xué)上已經(jīng)測(cè)過(guò),只需要做重測(cè)序就可以。河南高通量測(cè)序分析診斷
上海探普生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是醫(yī)藥健康,擁有一支專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。公司業(yè)務(wù)涵蓋病毒測(cè)序,病毒全基因組測(cè)序,病毒宏基因組測(cè)序,未知病原鑒定等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司注重以質(zhì)量為中心,以服務(wù)為理念,秉持誠(chéng)信為本的理念,打造醫(yī)藥健康良好品牌。在社會(huì)各界的鼎力支持下,持續(xù)創(chuàng)新,不斷鑄造***服務(wù)體驗(yàn),為客戶(hù)成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。