病原微生物檢測方法-多種PCR結(jié)合使用,基因芯片技術(shù)與多重PCR結(jié)合可以通過PCR對目的基因進(jìn)行放大,通過基因芯片的熒光探針增加檢測的靈敏性和特異性,使得兩種檢測技術(shù)的優(yōu)勢互補(bǔ),已應(yīng)用于病原微生物的檢測。將病原體特異性基因作為靶基因設(shè)計(jì)出引物與探針,進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,制備出寡核苷酸芯片,再對待測樣本靶基因進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物與病原菌多重PCR基因芯片檢測體系雜交,可根據(jù)雜交信號直觀地判讀樣品中所含病原體的種類、型別、毒力、侵襲力,從而對病原體進(jìn)行檢測和鑒定。傳統(tǒng)病原微生物檢測方法是什么?杭州病原鑒定找哪家
微生物因?yàn)轶w積小、質(zhì)量輕、適應(yīng)性強(qiáng)、繁殖能力強(qiáng)等特點(diǎn),普遍分布于自然界中。它們存在于食品、化妝品、飼料、環(huán)境等人們能觸及的各個(gè)角落中。某些微生物對產(chǎn)品的污染,不僅影響到產(chǎn)品本身的質(zhì)量,更嚴(yán)重的是它危及消費(fèi)者的健康和安全。微生物檢測的檢測項(xiàng)目:菌落總數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)、大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽孢桿菌、單增李斯特氏菌、雙歧桿菌、乳酸菌、罐頭商業(yè)無菌、阪崎腸桿菌、糞鏈球菌等。河南RNA微生物檢測公司未知病毒是指未被發(fā)現(xiàn)或證實(shí)的某種病毒。
微生物檢測中含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來自于一個(gè)親代細(xì)胞,那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)(pureculture)。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí),所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,方法有許多種。先把微生物懸液通過一系列稀釋,取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合,然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中,待凝固之后,把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個(gè)菌落,取單個(gè)菌落制成懸液,重復(fù)上述步驟數(shù)次,便可得到純培養(yǎng)物。
傳統(tǒng)病原微生物檢測方法是生化方法。生化方法檢測病原微生物實(shí)際上是測定微生物特異性酶。由于各種微生物所具有的酶系統(tǒng)不完全相同,對許多物質(zhì)的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物產(chǎn)生的不同代謝產(chǎn)物來間接檢測該微生物內(nèi)酶的有無,從而達(dá)到檢測特定微生物的目的。如沙門氏菌能產(chǎn)生辛酯酶,這一性能是除沙門氏菌外的各屬腸桿菌科細(xì)菌所不具備的。根據(jù)這一特性,甄宏太等報(bào)道了快速檢測沙門氏菌的辛酯酶法。大腸埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶,但以O(shè)157:H7為腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)卻不具此酶,故β2葡萄糖醛酸酶陰性已成為初步篩查EHEC的重要特征。微生物鑒定可以采用不同微生物對周圍環(huán)境的資源的利用度有所不同的特性來區(qū)別。
臨床微生物鑒定必須經(jīng)歷的過程:1.分離培養(yǎng):臨床細(xì)菌學(xué)不可缺少的基本技術(shù),是獲得純培養(yǎng)物的必要手段,即使自動化儀器先進(jìn)的現(xiàn)在也只能對純菌作出鑒定。2.細(xì)菌的菌落、色素、溶血性、氣味是鑒定的重要特征。3.形態(tài)學(xué)鑒定:如奴卡菌、紅球菌。4.動力在各種細(xì)菌鑒定:針對形態(tài)不易區(qū)分時(shí)來鑒別菌種。5.氧化酶,觸酶試驗(yàn)是分別革蘭陰性菌和革蘭陽性菌鑒定試驗(yàn)。傳統(tǒng)的鑒定方法通過選實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,同一科內(nèi)的不同屬、種可以選擇不同的鑒定指標(biāo)。微生物檢測方法中常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法,是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。杭州微生物篩查上哪找
微生物檢測必須嚴(yán)格把關(guān)是很有必要的。杭州病原鑒定找哪家
病毒鑒定常用方法有哪些?病原學(xué)檢測主要適用于急性期血液標(biāo)本,一般認(rèn)為發(fā)病7天內(nèi)檢測陽性率高。(1)核酸檢測:采用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。(2)病毒分離:將標(biāo)本接種于蚊源細(xì)胞(C6/36)或哺乳動物細(xì)胞(BHK21、Vero)進(jìn)行分離培養(yǎng),出現(xiàn)病變以后,用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進(jìn)行病毒分離。血清學(xué)檢測:(1)血清特異性IgM抗體:發(fā)病3天后可檢出病毒特異IgM抗體,但發(fā)病7天后檢出率高??刹捎肊LISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性,提示患者可能新近寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強(qiáng)的交叉反應(yīng),易于產(chǎn)生假陽性。(2)中和抗體:采用空斑減少中和試驗(yàn)方法檢測?;颊呋謴?fù)期血清中和抗體陽轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒,可以確診。杭州病原鑒定找哪家
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