隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,對(duì)微生物群(微生物組)的研究逐漸加深,研究熱點(diǎn)越來(lái)越多集中于環(huán)境和生物體相互作用的微生物群。加之測(cè)序成本降低,分析技術(shù)不斷提升,都使得宏基因組測(cè)序技術(shù)得到普遍應(yīng)用。為什么要做宏基因組:宏基因組相對(duì)16S來(lái)說(shuō)其物種分辨率會(huì)更高,隨著物種測(cè)序完成越來(lái)越多,數(shù)據(jù)庫(kù)更加完善,在腸道菌群方面基本能實(shí)現(xiàn)97%以上的菌都能鑒定到種,90%以上到菌株層面。而且可以同時(shí)獲得除RNA病毒外的所有物種的分布。此外包括菌基因組CNV等方法的出現(xiàn),可以直接通過(guò)大規(guī)模宏基因組測(cè)序不只找到可能的菌,進(jìn)一步還能鑒定出特定候選基因區(qū)段。在傳統(tǒng)的診斷檢測(cè)中對(duì)病原體的診斷檢測(cè)是通過(guò)體外培養(yǎng)的方式進(jìn)行的。杭州病毒宏基因組測(cè)序分析多少錢(qián)
病毒相關(guān)知識(shí):病毒是地球上數(shù)量多的生物實(shí)體,其中細(xì)菌病毒(即噬菌體)約有1031個(gè)類(lèi)群,從海洋到陸地再到人體幾乎都是它們的棲息地。研究者將病毒視為調(diào)節(jié)人類(lèi)生態(tài)系統(tǒng)的重要成員,人體內(nèi)主要包括真核病毒和噬菌體,包括雙鏈DNA(double-strandedDNA,dsDNA),單鏈DNA(single-strandedDNA,ssDNA)和RNA病毒。隨著對(duì)病毒研究的普遍開(kāi)展,“病毒組”與“病毒組學(xué)”的概念也應(yīng)運(yùn)而生,這些術(shù)語(yǔ)分別涵蓋了棲息在生態(tài)系統(tǒng)中的所有病毒及其基因組和對(duì)它們的研究(LefkowitzEJ,etal,2017)。根據(jù)病毒不同的特征進(jìn)行分類(lèi),包括病毒的宿主范圍;病毒的形態(tài)學(xué);病毒的基因組大??;病毒的核酸組成成分以及病毒的致病性。雖然所有的性狀在病毒分類(lèi)學(xué)的確定中都很重要,但目前利用平均核苷酸同源性(ANI)和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行序列比較被視為定義和區(qū)分病毒群類(lèi)的主要標(biāo)準(zhǔn)。山東水體微生物測(cè)序探普生物具備處理大量多樣的病毒樣本的經(jīng)驗(yàn),熟知各類(lèi)病毒樣本的特性,對(duì)于樣本準(zhǔn)備有獨(dú)特的方法指南。
病毒宏基因組測(cè)序的研究案例:噬菌體是糞便病毒組的主要成員,糞便病毒組移植(FVT)或能有效的調(diào)節(jié)腸道菌群。在該項(xiàng)概念驗(yàn)證試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),接受瘦小鼠的糞便病毒組移植后,飼喂高脂食物的小鼠體重增長(zhǎng)變慢,同時(shí)還能保持正常的血糖指標(biāo),F(xiàn)VT引起的腸道菌群變化介導(dǎo)了這些保護(hù)性功能代謝作用。這項(xiàng)研究表明,F(xiàn)VT療法或能用來(lái)改善肥胖和糖尿病等腸道菌群相關(guān)代謝類(lèi)疾病。對(duì)噬菌體不造成損傷,大程度保證了病毒活性,適用于下游FVT研究。宏病毒組學(xué)(ViralMetagenomics)是宏基因組學(xué)的一個(gè)分支,但與傳統(tǒng)的宏基因組學(xué)概念不同,它是在宏基因組學(xué)概念的基礎(chǔ)上,結(jié)合病毒自身的特點(diǎn),將宏基因組學(xué)方法應(yīng)用到病毒學(xué)領(lǐng)域而形成的。
病毒宏基因組學(xué)應(yīng)用:病毒宏基因組學(xué)已經(jīng)應(yīng)用到人類(lèi)、動(dòng)物和環(huán)境中,涉及到農(nóng)業(yè)、工業(yè)及畜牧業(yè)等各個(gè)領(lǐng)域,其應(yīng)用范圍已延伸到海洋、湖水、熱泉、下水道等無(wú)機(jī)環(huán)境,以及組織病料、血液、呼吸道、動(dòng)物排泄物等有機(jī)環(huán)境。應(yīng)用病毒宏基因組學(xué)的方法研究佛羅里達(dá)綠海龜?shù)睦w維狀瘤組織中發(fā)現(xiàn)了單鏈DNA病毒(Seaturtletornovirus1,STTV1)。分析了來(lái)自馬里蘭淡水湖中的RNA病毒宏基因組,結(jié)果獲得淡水湖中30多個(gè)RNA病毒家族序列,其中包含小RNA病毒、小雙股病毒及正黏病毒等。探普生物的病毒測(cè)序結(jié)果質(zhì)量有保障外。
病毒宏基因組學(xué)中包含兆級(jí)的短序列片段(Reads)。通過(guò)不同的序列拼接軟件將Reads拼接較長(zhǎng)的DNA序列片斷(Contigs)。數(shù)據(jù)組裝可通過(guò)K-mer分析評(píng)估各個(gè)樣品的測(cè)序深度,通過(guò)對(duì)SOAPdenovo設(shè)置不同K值,篩選較好組裝結(jié)果,對(duì)較好組裝結(jié)果進(jìn)行校正,并統(tǒng)計(jì)Reads利用率。接著利用已測(cè)序生物體的DNA序列構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù),將拼接后的Contigs通過(guò)不同的鑒定方案,與數(shù)據(jù)庫(kù)里的DNA序列信息進(jìn)行比對(duì),確定該序列來(lái)自的生物群落,篩選有用的基因信息。此外,還可以用一些工具對(duì)序列進(jìn)行基因預(yù)測(cè)(如Metagene、GeneMark、FragGeneScan等)。宏基因組技術(shù)都是在細(xì)菌領(lǐng)域使用的。宏基因?qū)W分析服務(wù)公司
病原微生物二代測(cè)序,也稱(chēng)宏基因組測(cè)序(mNGS)。杭州病毒宏基因組測(cè)序分析多少錢(qián)
病毒宏基因組測(cè)序相關(guān)知識(shí):DNA宏基因組測(cè)序的病原檢出率均高于培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法,表現(xiàn)出良好的診斷性能。DNA宏基因組測(cè)序已被用于診斷各種臨床傳染性疾病,例如血液傳染,肺和肺外結(jié)核(TB),侵襲性傳染,寄生蟲(chóng)傳染,傳染性心內(nèi)膜炎,復(fù)雜性肺炎,尿路傳染和實(shí)體移植后的繼發(fā)傳染等,為臨床傳染性疾病的診斷和提供了新的前景。盡管一項(xiàng)多中心的回顧性研究表明,目前使用mcfDNA宏基因組測(cè)序作為診斷常見(jiàn)傳染疾病的工具的優(yōu)勢(shì)并不明顯,但它可以提供比傳統(tǒng)方法更快、更早的診斷結(jié)果,以及在的升級(jí)/降級(jí)方面具有重要意義。杭州病毒宏基因組測(cè)序分析多少錢(qián)
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