宏基因組測(cè)序的挑戰(zhàn):背景干擾,病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi),臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復(fù)雜樣本,大量宿主信號(hào)掩蓋了微量病原信號(hào),致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因?yàn)镽NA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測(cè)序,因此病原宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)RNA病原體檢出率比DNA病毒更低。可以考慮對(duì)核酸樣本進(jìn)行特殊的處理,對(duì)病毒序列進(jìn)行特異性富集,再進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序。質(zhì)量控制:病原宏基因組測(cè)序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,例如文庫(kù)構(gòu)建涉及到基因組打斷,測(cè)序接頭鏈接,全基因組擴(kuò)增等多個(gè)步驟,每一步驟的目標(biāo)是要每個(gè)分子都以相同的效率執(zhí)行每個(gè)步驟,打斷有損失,連接有差別,擴(kuò)增有偏好,都會(huì)帶來(lái)檢測(cè)誤差。宏基因組技術(shù)都是在細(xì)菌領(lǐng)域使用的。山東病毒多樣性測(cè)序公司
優(yōu)化臨床制備病毒宏基因組測(cè)序所用樣本的方法:①介紹高通量病毒宏基因組測(cè)序的樣本制備步驟,對(duì)臨床樣本的總核酸進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增;②檢測(cè)了從血漿樣本中富集/擴(kuò)增DNA及RNA病毒的不同方法,一種包括過(guò)濾、核酸酶消化、在不同反應(yīng)中隨機(jī)擴(kuò)增DNA及RNA的步驟是較好的;③隨后在包含了不同病毒科的樣本中驗(yàn)證此方法,可高讀數(shù)地檢測(cè)到大多數(shù)病毒序列,且優(yōu)于現(xiàn)行的其它樣本制備方法;④該方法不只適用于血漿樣本,還可用于尿液、咽喉拭子等臨床樣本。重慶宏病毒組測(cè)序原理在探普生物進(jìn)行病毒宏基因組測(cè)序的流程簡(jiǎn)單。
病原宏基因組測(cè)序可與實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)技術(shù)聯(lián)合使用,實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)?!癛T-PCR由于其檢測(cè)速度快、操作流程簡(jiǎn)單、成本較低的原因,更適用于大規(guī)模的篩查中,以便快速獲得是否為冠狀病毒核酸陽(yáng)性的初步證據(jù),而對(duì)于RT-PCR檢測(cè)陰性、但臨床表型高度疑似的患者,利用mNGS進(jìn)一步確認(rèn)可有效提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性,并獲得是否有其他病原體傳染的信息?!睂?duì)于RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的樣本,也可以進(jìn)一步利用mNGS進(jìn)行病毒全序列的分析,從而幫助獲得病毒是否發(fā)生變異的信息,為疫苗、藥物研發(fā)等方面提供可靠證據(jù)。
目前技術(shù)的進(jìn)一步成熟,未來(lái)二代測(cè)序病原體檢測(cè)應(yīng)進(jìn)一步在成本下降、診斷標(biāo)準(zhǔn)完善、質(zhì)量控制提升等方面進(jìn)行完善。同時(shí)應(yīng)進(jìn)一步增加大樣本量的研究,以建立中國(guó)傳染病原體宏基因組學(xué)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。對(duì)于懷疑神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染的患者,如有條件,推薦在抽取腦脊液時(shí)同步留取2mL腦脊液標(biāo)本保存于-16~20℃冰箱。在完成常規(guī)生物化學(xué)檢查和培養(yǎng)之后,若3d內(nèi)未獲得明確的病原學(xué)依據(jù)且經(jīng)驗(yàn)性抗傳染無(wú)效,推薦對(duì)留存的腦脊液標(biāo)本進(jìn)行二代測(cè)序檢測(cè)。若未留存標(biāo)本,可重新采集標(biāo)本(A,Ⅱ)。高通量測(cè)序技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確而科學(xué)的基因測(cè)序分析結(jié)果,為病情防控提供有力技術(shù)保障。
宏基因組測(cè)序技術(shù)注意事項(xiàng):傳統(tǒng)微生物檢測(cè)由于時(shí)間長(zhǎng)、陽(yáng)性率低、檢測(cè)目標(biāo)單一,限制了傳染疾病的診治。宏基因組測(cè)序技術(shù)不依賴(lài)于微生物的分離培養(yǎng),克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制,為研究和開(kāi)發(fā)利用占微生物種類(lèi)99%以上的未可培養(yǎng)的微生物提供了一種新的途徑和良好的策略。宏基因組測(cè)序以無(wú)需純化培養(yǎng)、能夠快速全方面的展示序列信息的優(yōu)勢(shì),逐步在臨床上得到了普遍應(yīng)用。病原宏基因組測(cè)序檢測(cè)出病原體并報(bào)告相應(yīng)被檢測(cè)出的序列數(shù),再依據(jù)大數(shù)據(jù)庫(kù)判定是否為致病病原體。然而不同的測(cè)序平臺(tái)采用不同的數(shù)據(jù)庫(kù),再由不同的研發(fā)、臨床和檢驗(yàn)**解讀,缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)差異。因此仍需將病原宏基因組測(cè)序檢測(cè)數(shù)據(jù)和臨床更好的結(jié)合,從而更準(zhǔn)確鑒定致病病原體。病原微生物二代測(cè)序也稱(chēng)宏基因組測(cè)序(mNGS)是目前臨床上針對(duì)病原常用的基因測(cè)序方法。山東病毒多樣性測(cè)序公司
宏病毒組其實(shí)是病毒的宏基因組。山東病毒多樣性測(cè)序公司
病原微生物二代測(cè)序也稱(chēng)宏基因組測(cè)序(mNGS)是目前臨床上針對(duì)病原較常用的基因測(cè)序方法。通過(guò)對(duì)疑似傳染標(biāo)本采集提取后(無(wú)需培養(yǎng))直接進(jìn)行高通量測(cè)序,利用病原微生物數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)和分析后可以獲得疑似致病微生物種屬信息?;贜GS的宏基因組學(xué)檢測(cè)技術(shù)在2014年被用于臨床傳染患者的病原學(xué)診斷。目前,多個(gè)省市已經(jīng)將病原微生物二代測(cè)序納入醫(yī)保報(bào)銷(xiāo),助力病毒檢測(cè)!目前,國(guó)家微生物科學(xué)數(shù)據(jù)中心數(shù)據(jù)資源總量已超過(guò)300TB,數(shù)據(jù)記錄數(shù)超過(guò)了40億條。可用于臨床的微生物數(shù)據(jù)庫(kù)包括了超過(guò)18000條信息。山東病毒多樣性測(cè)序公司
上海探普生物科技有限公司一直專(zhuān)注于從事生物科技專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)服務(wù),化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、易制毒化學(xué)品),實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,計(jì)算機(jī)、軟件及輔助設(shè)備,電子產(chǎn)品銷(xiāo)售,計(jì)算機(jī)軟件開(kāi)發(fā)及維護(hù),計(jì)算機(jī)信息系統(tǒng)集成服務(wù)等。,是一家醫(yī)藥健康的企業(yè),擁有自己**的技術(shù)體系。目前我公司在職員工以90后為主,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。上海探普生物科技有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋病毒測(cè)序,病毒全基因組測(cè)序,病毒宏基因組測(cè)序,未知病原鑒定,堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴(lài)。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù),我們相信誠(chéng)實(shí)正直、開(kāi)拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個(gè)人帶來(lái)共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過(guò)幾年的發(fā)展,已成為病毒測(cè)序,病毒全基因組測(cè)序,病毒宏基因組測(cè)序,未知病原鑒定行業(yè)出名企業(yè)。