宏基因組測序的挑戰(zhàn)：背景干擾，病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi)，臨床病原常為起始量低，背景噪音大的復(fù)雜樣本，大量宿主信號掩蓋了微量病原信號，致使敏感性偏低，難以有效區(qū)分。另外，因為RNA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測序，因此病原宏基因組測序技術(shù)對RNA病原體檢出率比DNA病毒更低?？梢钥紤]對核酸樣本進(jìn)行特殊的處理，對病毒序列進(jìn)行特異性富集，再進(jìn)行建庫測序。質(zhì)量控制：病原宏基因組測序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實驗操作過程，例如文庫構(gòu)建涉及到基因組打斷，測序接頭鏈接，全基因組擴(kuò)增等多個步驟，每一步驟的目標(biāo)是要每個分子都以相同的效率執(zhí)行每個步驟，打斷有損失，連接有差別，擴(kuò)增有偏好，都會帶來檢測誤差。對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體。病原微生物多樣性測序價格
病毒宏基因組測序相關(guān)知識：DNA宏基因組測序的病原檢出率均高于培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法，表現(xiàn)出良好的診斷性能。DNA宏基因組測序已被用于診斷各種臨床傳染性疾病，例如血液傳染，肺和肺外結(jié)核（TB），侵襲性傳染，寄生蟲傳染，傳染性心內(nèi)膜炎，復(fù)雜性肺炎，尿路傳染和實體移植后的繼發(fā)傳染等，為臨床傳染性疾病的診斷和提供了新的前景。盡管一項多中心的回顧性研究表明，目前使用mcfDNA宏基因組測序作為診斷常見傳染疾病的工具的優(yōu)勢并不明顯，但它可以提供比傳統(tǒng)方法更快、更早的診斷結(jié)果，以及在的升級/降級方面具有重要意義。北京微生物多樣性分析服務(wù)高通量測序技術(shù)對核酸進(jìn)行測序是非特異的,因此,對一無所知的核酸也可以實現(xiàn)鑒別。
由于探普生物具備處理大量多樣的病毒樣本的經(jīng)驗，熟知各類病毒樣本的特性，因此對于樣本準(zhǔn)備有獨特的方法指南，這就為后續(xù)的分析結(jié)果打下了牢固的基礎(chǔ)，減少了客戶和公司之間的摩擦，也幾乎沒有售后問題。獨有的實驗和分析流程可兼容高復(fù)雜度低濃度的病毒核酸。因此探普生物的病毒測序結(jié)果質(zhì)量有保障外還具備：樣本準(zhǔn)備簡單，商務(wù)流程通暢，回復(fù)消息及時，反饋處理迅速等優(yōu)點。我國經(jīng)濟(jì)進(jìn)入“新常態(tài)”，總體上推動["病毒測序","病毒全基因組測序","病毒宏基因組測序","未知病原鑒定"]從粗放式增長向注重質(zhì)量、效率方向轉(zhuǎn)變。
病毒宏基因組測序的流程：在探普生物進(jìn)行病毒宏基因組測序的流程非常簡單，簡而言之，客戶只需要說清楚樣品情況，準(zhǔn)備樣品即可，其他事宜都由探普來進(jìn)行安排。大致流程如下：1)與銷售人員溝通項目需求和樣本情況；2)探普生物工作人員擬定項目合同，雙方協(xié)商合同內(nèi)容后簽字蓋章；3)按樣本準(zhǔn)備指南準(zhǔn)備好樣本，填寫信息單后通知銷售人員預(yù)訂干冰，安排樣本寄運輸；4)客戶支付項目啟動款，探普生物啟動項目實驗和分析并提供測序報告；5)客戶支付項目尾款，探普生物提交測序數(shù)據(jù)和分析結(jié)果；6)售后問題處理，項目結(jié)題。對病毒全基因組進(jìn)行測序，利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因組序列.
病毒宏基因組學(xué)的相關(guān)知識：病毒是引發(fā)人畜共患病的主要病原體之一，伴隨環(huán)境、生態(tài)和人類行為等各方面因素的變化，新發(fā)人畜共患病也呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，它們極大地威脅著人類和動物的健康和生命，并給畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)的健康發(fā)展以及自然界生態(tài)鏈的平衡帶來危害及災(zāi)難。然而，許多新發(fā)人畜共患病的病原初往往是未知的，如1986年的牛海綿狀腦病、1999年的尼帕病毒、2003年的SARS冠狀病毒、1997至今不斷變異的高致病性禽流感H5和H；7、2009年的甲型H1N1、2010年的布尼亞病毒，它們都經(jīng)歷了一個從未知到己知的探索過程。為此，及早地發(fā)現(xiàn)，鑒別未知的或新出現(xiàn)的病原，是有效預(yù)防和控制傳染病的先決條件之一。傳統(tǒng)的診斷技術(shù)已不能滿足提前預(yù)警或快速診斷新發(fā)人畜共患病的需求。近年來，病毒宏基因組學(xué)的出現(xiàn)和興起，為人類診斷新發(fā)人畜共患病和探索潛在的病原提供了巨大的幫助。對病毒全基因組進(jìn)行測序,利用生物信息分析手段，得到病毒的全基因組序列。武漢宏病毒學(xué)測序
傳統(tǒng)Sanger測序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列。病原微生物多樣性測序價格
病毒宏基因組學(xué)中包含兆級的短序列片段（Reads）。通過不同的序列拼接軟件將Reads拼接較長的DNA序列片斷（Contigs）。數(shù)據(jù)組裝可通過K-mer分析評估各個樣品的測序深度，通過對SOAPdenovo設(shè)置不同K值，篩選較好組裝結(jié)果，對較好組裝結(jié)果進(jìn)行校正，并統(tǒng)計Reads利用率。接著利用已測序生物體的DNA序列構(gòu)建數(shù)據(jù)庫，將拼接后的Contigs通過不同的鑒定方案，與數(shù)據(jù)庫里的DNA序列信息進(jìn)行比對，確定該序列來自的生物群落，篩選有用的基因信息。此外，還可以用一些工具對序列進(jìn)行基因預(yù)測（如Metagene、GeneMark、FragGeneScan等）。病原微生物多樣性測序價格