RNA全基因組測序分析方法

來源: 發(fā)布時間:2023-11-20

對病毒的全基因組進行測序時,生物信息學(xué)分析是如何進行的?生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對病毒的全基因組進行測序的下機數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點,優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫,搭載了的生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。探普生物基于該特點,優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫,專門搭載了生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。生物信息學(xué)流程主要包括對非目標(biāo)數(shù)據(jù)進行去除以及對目標(biāo)序列進行篩選,高質(zhì)量高完整度的序列拼接以及后續(xù)的高級分析,如SNP分析,進化分析,耐藥位點分析等。在探普的流程下,可以獲得完整性很高的基因組序列。



病毒全基因組測序具有的特點:獨有的一定定量技術(shù),實現(xiàn)病原定量分析.RNA全基因組測序分析方法

病毒全基因組測序定中為了便于新發(fā)或罕見病毒性傳染病的篩查檢測,利用多重置換擴增技術(shù),以負鏈RNA病毒—發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒和正鏈RNA病毒—登革病毒為模擬樣本探索臨床樣本中RNA病毒基因組非特異性擴增方法。研究中通過梯度稀釋的RNA病毒模擬樣本中可能存在的不同豐度的病原體,樣本核酸依次加工成單鏈cDNA,雙鏈cDNA,T4DNA連接酶處理后的雙鏈cDNA以及添加外源輔助RNA后合成并連接的雙鏈cDNA形式,然后進行Phi29DNA聚合酶等溫擴增,使用熒光定量PCR方法比較各種方法對RNA病毒核酸擴增的影響。


病毒序列測序分析要多久全國開設(shè)病毒相關(guān)測序的公司不超過5家。

病毒的基因重組特點是什么? 滅活病毒間也會發(fā)生重組 :例如用紫外線滅活的兩株同種病毒,一同培養(yǎng)??墒箿缁畹牟《緩?fù)活產(chǎn)生出侵染性病毒體,此稱為多重復(fù)活(Multiplicity reactivation),這是因為兩種病毒核酸上受損害的基因部位不同,由于重組相互彌補而得到復(fù)活。因此現(xiàn)今不用紫外線滅活病毒制造疫苗,以防復(fù)活。 死活病毒間發(fā)生重組 :例如將能在雞胚中生長良好的甲型流感病毒(A0或A1亞型)疫苗株經(jīng)紫外線滅活后,再加亞洲甲型(A2亞型)活流感病毒一同培養(yǎng),產(chǎn)生出具有前者特點的A2亞型流感病毒,可供制作疫苗,此稱為交叉復(fù)活。

能實現(xiàn)對病毒的全基因組進行測序的技術(shù)手段:早期在高通量測序技術(shù)普及之前,對病毒的全基因組進行測序是通過非特異性擴增+克隆結(jié)合sanger測序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準確度高,讀長很長,但與此同時,擴增和克隆工作費時費力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強,這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準濃度和體積后進行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。


高通量測序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準濃度和體積后進行測序和分析.

一直以來,病毒基因組測序都是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測序以及對應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測序相比,NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列,測序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大,其序列拼接難度也隨之增加。而且對于低濃度高復(fù)雜度的樣本,研究者除了PCR外別無他法。而PCR方法往往具有偏好性,丟失的片段將為序列組裝帶來非常高的失敗率。對于完全未知的樣本,無法通過PCR進行富集,要鑒定其種類需要調(diào)用各種方法,逐個嘗試,工作量之大,其效率之低,使得一個新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。


病毒全基因組測序平臺,鍛煉出—批精通測序的檢測隊伍。RNA病毒高通量測序突變分析公司

測序覆蓋度是反映測序隨機性的指標(biāo)之一。RNA全基因組測序分析方法

病毒全基因組測序定中利用病毒傳播過程中核酸序列上特定位置的變化來進行分型,著重于區(qū)分不同型別病毒的來源,是我國調(diào)整防控策略的重要依據(jù)之一。傳統(tǒng)的病原微生物檢測手段包括形態(tài)學(xué)檢測、培養(yǎng)分離、生化檢測和免疫學(xué)檢測。這些方法檢測周期長、靈敏度低,對操作人員的技術(shù)水平要求比較高等因素;熒光定量PCR技術(shù)和等溫擴增技術(shù)等分子生物學(xué)的檢測方法部分解決了上述問題,簡單快速,通過對核酸特異性序列的檢測,可在短時間內(nèi)快速判斷病原體的種類,但是這些方法無法進行混合傳染鑒定和病毒溯源,隨著基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,高通量測序技術(shù)已經(jīng)能夠做到不依賴于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng),可直接對臨床樣本中的核酸進行高通量測序,然后與數(shù)據(jù)庫進行比對,實現(xiàn)傳染性疾病的溯源、檢測、分型和耐藥評估等多個方面,受到越來越多臨床和科研工作者的關(guān)注。RNA全基因組測序分析方法