高通量測(cè)序技術(shù)具有的作用:高通量測(cè)序技術(shù)在冠狀病毒的鑒定中發(fā)揮了重要作用,先通過該技術(shù)確認(rèn)了該病原為以前未知的β冠狀病毒,其次確認(rèn)了該病毒與蝙蝠相關(guān)冠狀病毒ZC45和ZXC21密切相關(guān),同源性約為88%,后高通量測(cè)序?yàn)楹罄m(xù)的診斷提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。高通量測(cè)序能否定向檢測(cè)細(xì)菌病毒等微生物?例如某人有皮膚病,提取組織,能否通過高通量測(cè)序來檢測(cè)后列出所有的致病菌?;蛘弋?dāng)懷疑的時(shí)候,在人體組織中檢測(cè)是否有某種特定的細(xì)菌或者病毒。(不求原理),就是想知道現(xiàn)在的測(cè)序技術(shù)能否替代傳統(tǒng)臨床檢驗(yàn)方法。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)等方法,對(duì)樣本的全微生物檢測(cè),或者特定微生物檢測(cè),基因測(cè)序技術(shù)目前的時(shí)間消耗,準(zhǔn)確率,和金錢成本大概如何??梢远ㄏ驒z測(cè),用特異引物就可以。
想要通過高通量測(cè)序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。廣東病毒二代測(cè)序分析服務(wù)
二代測(cè)序應(yīng)用的患者類型的推薦:共識(shí)明確指出了二代測(cè)序應(yīng)用的患者類型及使用的時(shí)機(jī)的意見:對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染/血流傳染/呼吸道傳染患者,3天是二代測(cè)序使用的時(shí)機(jī),在傳統(tǒng)方法(常規(guī)的生化檢查和培養(yǎng))3天未報(bào)陽性且經(jīng)驗(yàn)性調(diào)整無效時(shí),強(qiáng)烈推薦二代測(cè)序檢測(cè);對(duì)疑似病毒傳染患者,包括:疑似神經(jīng)系統(tǒng)病毒傳染和病毒性肺炎且病情持續(xù)進(jìn)展的患者,若完善傳統(tǒng)PCR檢測(cè)后依然未獲得明確的病原學(xué)證據(jù)時(shí),強(qiáng)烈推薦二代測(cè)序檢測(cè)。對(duì)于疑似局灶性傳染患者完成常規(guī)的生物化學(xué)、培養(yǎng)或PCR檢測(cè)后,若未能獲取病原學(xué)診斷結(jié)果,推薦將二代測(cè)序作為檢測(cè)方法。而對(duì)于懷疑繼發(fā)性血流傳染患者:在原發(fā)傳染灶的病原學(xué)檢測(cè)為陰性或因各種因素?zé)o法送檢合適標(biāo)本的情況下,可考慮將血標(biāo)本的二代測(cè)序檢測(cè)作為二線檢測(cè)。
四川高通量測(cè)序服務(wù)高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析。
二代測(cè)序應(yīng)用的患者類型的推薦:共識(shí)明確指出了二代測(cè)序應(yīng)用的患者類型及使用的時(shí)機(jī)的意見:對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染/血流傳染/呼吸道傳染患者,3天是二代測(cè)序使用的時(shí)機(jī),在傳統(tǒng)方法(常規(guī)的生化檢查和培養(yǎng))3天未報(bào)陽性且經(jīng)驗(yàn)性調(diào)整無效時(shí),強(qiáng)烈推薦二代測(cè)序檢測(cè);對(duì)疑似病毒傳染患者,包括:疑似神經(jīng)系統(tǒng)病毒傳染和病毒性肺炎且病情持續(xù)進(jìn)展的患者,若完善傳統(tǒng)PCR檢測(cè)后依然未獲得明確的病原學(xué)證據(jù)時(shí),強(qiáng)烈推薦二代測(cè)序檢測(cè)。對(duì)于疑似局灶性傳染患者完成常規(guī)的生物化學(xué)、培養(yǎng)或PCR檢測(cè)后,若未能獲取病原學(xué)診斷結(jié)果,推薦將二代測(cè)序作為檢測(cè)方法。而對(duì)于懷疑繼發(fā)性血流傳染患者:在原發(fā)傳染灶的病原學(xué)檢測(cè)為陰性或因各種因素?zé)o法送檢合適標(biāo)本的情況下,可考慮將血標(biāo)本的二代測(cè)序檢測(cè)作為二線檢測(cè)。
病毒全基因組測(cè)序定:探普生物對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的實(shí)驗(yàn)基于二代測(cè)序技術(shù)。樣本經(jīng)過核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這3大基本流程后轉(zhuǎn)換成了序列數(shù)據(jù)。先,在核酸純化環(huán)節(jié),探普提供專門針對(duì)性的核酸純化樣本指南,以提高目的物種的核酸純度和得率,與此同時(shí)探普生物也提供核酸純化服務(wù)。第二,文庫構(gòu)建環(huán)節(jié),樣本的核酸具備濃度低,總量少的特點(diǎn)。探普生物專門針對(duì)這一點(diǎn)開發(fā)了超微量核酸文庫構(gòu)建,可以將0.01ng/μl甚至更低濃度的核酸構(gòu)建成測(cè)序文庫。第三,生物信息學(xué)分析環(huán)節(jié)。生存環(huán)境和狀態(tài)決定了對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的下機(jī)數(shù)據(jù)一般都伴隨大量的宿主和其他微生物的數(shù)據(jù)。探普生物基于該特點(diǎn),優(yōu)化了自有數(shù)據(jù)庫,搭載了專門用的的生物信息學(xué)分析流程,可處理復(fù)雜背景下的目標(biāo)物種序列。
病毒全基因組測(cè)序具有的特點(diǎn):獨(dú)有的一定定量技術(shù),實(shí)現(xiàn)病原定量分析.
病毒全基因組測(cè)序定在探普生物長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行過程中,我們接觸到的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序項(xiàng)目有比較豐富的應(yīng)用場(chǎng)景。先,從事基因進(jìn)化/疫苗/藥品/抗體研制方向的研究的研究者一定會(huì)用到測(cè)序。這種場(chǎng)景一般是用密集的sanger測(cè)序監(jiān)測(cè)某幾個(gè)關(guān)鍵基因,搭載一定頻率的全基因組測(cè)序。這樣的組合省時(shí)省力省經(jīng)費(fèi),同時(shí)能達(dá)到研究目的。此外,有的單位需要對(duì)傳染病的病原進(jìn)行流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和研究,如疾控/疫控中心、醫(yī)院的傳染病科室以及一些高校和研究所的相應(yīng)課題組,可能需要對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序以后,結(jié)合其他上下游的研究數(shù)據(jù),達(dá)到研究或者監(jiān)測(cè)疫病的目的。
高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析.廣東病毒二代測(cè)序分析服務(wù)
探普生物獨(dú)有的實(shí)驗(yàn)和分析流程,可兼容高復(fù)雜度,低濃度的病毒核酸。廣東病毒二代測(cè)序分析服務(wù)
能實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序的技術(shù)手段:早期在高通量測(cè)序技術(shù)普及之前,對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序是通過非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測(cè)序來完成的。當(dāng)物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴(kuò)增+sanger測(cè)序獲得全基因組序列。Sanger測(cè)序準(zhǔn)確度高,讀長(zhǎng)很長(zhǎng),但與此同時(shí),擴(kuò)增和克隆工作費(fèi)時(shí)費(fèi)力,由于流程繁瑣,加上快速變異導(dǎo)致引物無法通用,該方法對(duì)于大量基因組的測(cè)序工作而言,可操作性不強(qiáng),這對(duì)于研究者一直是一個(gè)困擾。高通量測(cè)序技術(shù)正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標(biāo)準(zhǔn)濃度和體積后進(jìn)行測(cè)序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進(jìn)行了大量有針對(duì)性的研發(fā)和測(cè)試,開發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序,該流程自運(yùn)行以來廣受研究者們好評(píng)。
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