病毒是引發(fā)人畜共患病的主要病原體之一,伴隨環(huán)境、生態(tài)和人類(lèi)行為等各方面因素的變化,新發(fā)人畜共患病也呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢(shì),它們極大地威脅著人類(lèi)和動(dòng)物的健康和生命,并給畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)的健康發(fā)展以及自然界生態(tài)鏈的平衡帶來(lái)危害及災(zāi)難。然而,許多新發(fā)人畜共患病的病原初往往是未知的,如1986年的牛海綿狀腦病、1999年的尼帕病毒、2003年的SARS冠狀病毒、1997至今不斷變異的高致病性禽流感H5和H;7、2009年的甲型H1N1、2010年的新型布尼亞病毒,它們都經(jīng)歷了一個(gè)從未知到己知的探索過(guò)程。為此,及早地發(fā)現(xiàn),鑒別未知的或新出現(xiàn)的病原,是有效預(yù)防和控制傳染病的先決條件之一。傳統(tǒng)的診斷技術(shù)已不能滿足提前預(yù)警或快速診斷新發(fā)人畜共患病的需求。近年來(lái),病毒宏基因組學(xué)的出現(xiàn)和興起,為人類(lèi)診斷新發(fā)人畜共患病和探索潛在的病原提供了巨大的幫助。病毒研究的發(fā)展常常與病毒培養(yǎng)和檢測(cè)方法的進(jìn)步有密切的關(guān)系。宏基因?qū)W分析檢測(cè)
宏基因組測(cè)序的挑戰(zhàn):背景干擾:病原樣本深藏在大量宿主和其它微生物之內(nèi),臨床病原常為起始量低,背景噪音大的復(fù)雜樣本,大量宿主信號(hào)掩蓋了微量病原信號(hào),致使敏感性偏低,難以有效區(qū)分。另外,因?yàn)镽NA病毒需先轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA(cDNA)再進(jìn)行測(cè)序,因此病原宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)RNA病原體檢出率比DNA病毒更低。可以考慮對(duì)核酸樣本進(jìn)行特殊的處理,對(duì)病毒序列進(jìn)行特異性富集,再進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序。質(zhì)量控制:病原宏基因組測(cè)序技術(shù)涉及一系列繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,例如文庫(kù)構(gòu)建涉及到基因組打斷,測(cè)序接頭鏈接,全基因組擴(kuò)增等多個(gè)步驟,每一步驟的目標(biāo)是要每個(gè)分子都以相同的效率執(zhí)行每個(gè)步驟,打斷有損失,連接有差別,擴(kuò)增有偏好,都會(huì)帶來(lái)檢測(cè)誤差。宏基因組測(cè)序找哪家病毒全基因組測(cè)序產(chǎn)品特點(diǎn):無(wú)需培養(yǎng)和特異性擴(kuò)增,對(duì)采集臨床樣本直接檢測(cè)。
在探普生物進(jìn)行病毒宏基因組測(cè)序的流程非常簡(jiǎn)單,簡(jiǎn)而言之,客戶只需要說(shuō)清楚樣品情況,準(zhǔn)備樣品即可,其他事宜都由探普來(lái)進(jìn)行安排。大致流程如下:1)與銷(xiāo)售人員溝通項(xiàng)目需求和樣本情況;2)探普生物工作人員擬定項(xiàng)目合同,雙方協(xié)商合同內(nèi)容后簽字蓋章;3)按樣本準(zhǔn)備指南準(zhǔn)備好樣本,填寫(xiě)信息單后通知銷(xiāo)售人員預(yù)訂干冰,安排樣本寄運(yùn)輸;4)客戶支付項(xiàng)目啟動(dòng)款,探普生物啟動(dòng)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)和分析并提供測(cè)序報(bào)告;5)客戶支付項(xiàng)目尾款,探普生物提交測(cè)序數(shù)據(jù)和分析結(jié)果;6)售后問(wèn)題處理,項(xiàng)目結(jié)題。
宏基因組測(cè)序:宏基因組測(cè)序是對(duì)人體樣本或特定環(huán)境樣品中的總核酸(DNA或RNA)進(jìn)行高通量測(cè)序,通過(guò)比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù),得到傳染病原體的信息,能夠檢測(cè)出新發(fā)和罕見(jiàn)病原體,特別是在未知病原檢測(cè)中發(fā)揮了難以替代的作用,當(dāng)然宏基因組檢測(cè)方法也面臨不少挑戰(zhàn),檢測(cè)結(jié)果的靈敏度受宿主及其他微生物背景核酸的影響。高通量測(cè)序技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確而科學(xué)的基因測(cè)序分析結(jié)果,為防控提供有力技術(shù)保障??茖W(xué)家通過(guò)對(duì)病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序,可以了解不同傳播階段的變異情況,推測(cè)病毒對(duì)人的傳染力的變化及傳播情況。比較基因組學(xué)層面可通過(guò)差異分析、同源基因分析、共線性分析、物種進(jìn)化分析等手段探究病毒的毒力系統(tǒng)。
病毒宏基因組測(cè)序可直接對(duì)樣本中的核酸進(jìn)行高通量測(cè)序,鑒定樣本中可能存在的病原菌,輔助臨床決策。覆蓋細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)、衣原體、立克次氏體、螺旋體等13396種微生物;同時(shí)進(jìn)行耐藥基因檢測(cè),涵蓋266種耐藥菌,2984種抗性基因。宏基因組測(cè)序在新發(fā)腹瀉病毒鑒定中的應(yīng)用:發(fā)現(xiàn)和鑒定新病毒以及確定新病毒與疾病的關(guān)系是預(yù)防、診斷和新發(fā)病毒性傳染病的首要任務(wù)。高通量測(cè)序技術(shù)突破了傳統(tǒng)技術(shù)方法的局限,可以直接以標(biāo)本中所有的遺傳物質(zhì)為研究對(duì)象,從而能夠快速地鑒定出標(biāo)本中存在的病毒,形成了一門(mén)研究特定環(huán)境中病毒群落的新興學(xué)科:病毒宏基因組學(xué)(宏病毒組)??梢酝ㄟ^(guò)控制微生物的生長(zhǎng)環(huán)境來(lái)判斷微生物的種屬類(lèi)型。河北皮膚微生物多樣性測(cè)序
對(duì)人和動(dòng)物具有致病性的微生物稱(chēng)為病原微生物,又稱(chēng)病原體。宏基因?qū)W分析檢測(cè)
宏基因組有廣義和狹義兩種概念。廣義的概念是指所有可能與人的生活密切相關(guān)的微生物的基因組,包括長(zhǎng)期共生在體內(nèi)的微生物,也包括可以進(jìn)入體內(nèi),對(duì)人類(lèi)的生活造成不同形式的影響的微生物。而狹義的宏基因組是指長(zhǎng)期共生在體內(nèi)的微生物。宏基因組測(cè)序分析技術(shù):?jiǎn)问枪采谌梭w內(nèi)的微生物就有1000多種,特別是胃腸道內(nèi)的微生物為豐富。宏基因組除了這些微生物外,也包括以其他方式偶爾進(jìn)入人體內(nèi)的微生物,這些微生物可能形成病源體,影響我們的健康?,F(xiàn)在科學(xué)家可以分析和發(fā)現(xiàn)引起疾病的異常微生物存在與活動(dòng),從而保護(hù)人體的健康。宏基因?qū)W分析檢測(cè)
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