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泛凋亡!TRIM56調(diào)節(jié)YBX1泛素化降解

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-12

脊髓損傷(SCI)是SHU神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p傷,LIAO 極具挑戰(zhàn)。促炎性細(xì)胞死亡影響神經(jīng)炎癥和損傷預(yù)后。PANoptosis是新發(fā)現(xiàn)的促炎性細(xì)胞死亡類型,通過PANoptosome調(diào)節(jié)多種細(xì)胞死亡執(zhí)行分子JI活,為SCILIAO 提供新靶點(diǎn),但其具體作用和機(jī)制尚待闡明。

 

2024年9月,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院***附屬醫(yī)院團(tuán)隊(duì)在Advanced Science(IF=14.3)上,發(fā)表“TRIM56 Modulates YBX1 Degradation to Ameliorate ZBP1-Mediated Neuronal PANoptosis in Spinal Cord Injury”的研究成果。揭示了YBX1在SCI發(fā)病機(jī)理中調(diào)節(jié)ZBP1介導(dǎo)的PANoptosis的新功能,為SCI的LIAO 策略提供了新的見解。

圖形摘要:

 


Highlights如下:

1)SCI后神經(jīng)元中的YBX1表達(dá)明顯增加。

2)YBX1通過ZBP1介導(dǎo)PANoptosis,促進(jìn)脊髓損傷。

3)機(jī)制上,TRIM56與YBX1結(jié)合,促進(jìn)其泛素化,從而加速其降解,導(dǎo)致YBX1穩(wěn)定Zbp1 mRNA能力下降,ZBP1的表達(dá)減少,進(jìn)一步減弱ZBP1介導(dǎo)的PANoptosis,抑制脊髓損傷。

表達(dá)相關(guān)性:

SCI后神經(jīng)元中的YBX1表達(dá)明顯增加。

功能研究:

YBX1敲除抑制神經(jīng)元的PANoptosis,促進(jìn)脊髓損傷后的功能恢復(fù)。

機(jī)制研究:


1)YBX1通過調(diào)節(jié)Zbp1的穩(wěn)定性來調(diào)節(jié)脊髓損傷后神經(jīng)元的PANoptosis

YBX1是一個(gè)重要的細(xì)胞內(nèi)RBP,因此YBX1可能通過影響相關(guān)RNA影響脊髓損傷小鼠的預(yù)后。RIP-seq實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),YBX1-RIP組中Zbp1的富集程度高于IgG組(圖1a)。RIP-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果也支持這一結(jié)果(圖1b)。而WB和qPCR實(shí)驗(yàn)表明,Zbp1 mRNA的豐度和ZBP1的蛋白表達(dá)與YBX1表達(dá)的變化相關(guān)(圖1c-e)。結(jié)果表明,YBX1通過增加Zbp1的穩(wěn)定性來促進(jìn)ZBP1的蛋白表達(dá)。


后續(xù)的功能研究結(jié)果顯示,ZBP1敲除可有效抑制YBX1過表達(dá)引起的Cle-CASP1、GSDMD-N、Cle-CASP3、p-RIPK3和p-MLKL水平升高,及IL-18和IL-1β水平升高(圖1f-i)。表明ZBP1介導(dǎo)的PANoptosis在SCI后神經(jīng)元中發(fā)生,并受YBX1調(diào)節(jié)。

1 YBX1通過調(diào)節(jié)Zbp1的穩(wěn)定性來調(diào)節(jié)脊髓損傷后神經(jīng)元的PANoptosisRef. Fig 3/S4-7)


2)TRIM56 與 YBX1 相互作用


第一步,確定調(diào)節(jié)YBX1表達(dá)的潛在機(jī)制---泛素-蛋白酶體降解途徑

為了進(jìn)一步確定調(diào)節(jié)YBX1表達(dá)的潛在機(jī)制,泛素-蛋白酶體降解途徑和自噬-溶酶體途徑是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的兩種重要途徑。用MG132、3MA和CQ處理原代神經(jīng)元(3MA是一種普遍使用的抑制細(xì)胞自噬的抑制劑,可抑制III類PI3K;CQ通過增加酸性內(nèi)體/溶酶體的pH值來破壞溶酶體功能;MG132是一種普遍使用的泛素-蛋白酶體降解途徑抑制劑。),發(fā)現(xiàn)MG132處理后,YBX1的表達(dá)水平升高(圖2a)。表明泛素-蛋白酶體降解途徑可能是YBX1在神經(jīng)元中的主要調(diào)節(jié)機(jī)制。


第二步,確定TRIM56與YBX1相互作用

IP-MS和分子對(duì)接分析顯示,E3泛素連接酶TRIM56與YBX1強(qiáng)結(jié)合(圖2b-e)。細(xì)胞水平內(nèi)源性、外源性Co-IP實(shí)驗(yàn)證實(shí)TRIM56與YBX1相互作用(圖2f-h)。另外,Co-IP實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn),在SCI模型小鼠和OGD處理過的神經(jīng)元中,TRIM56的表達(dá)及其與YBX1的結(jié)合均減少(圖2i-j)。表明TRIM56與YBX1之間存在相互作用。


第三步,確定TRIM56與YBX1相互作用的結(jié)合區(qū)域

構(gòu)建一系列截短的Myc標(biāo)簽YBX1載體,進(jìn)行Co-IP實(shí)驗(yàn),以確定YBX1 TRIM56特異性結(jié)合的區(qū)域。Co-IP結(jié)果顯示,TRIM56只與YBX1的M3(Δ126-324)片段結(jié)合(圖2k-l)。表明TRIM56與YBX1之間存在直接相互作用。

2 TRIM56與YBX1 相互作用Ref. Fig 4/S9)


3)TRIM56促進(jìn)YBX1的泛素化和降解


第一步,TRIM56促進(jìn)YBX1降解

為了明確調(diào)節(jié)TRIM56是否會(huì)影響YBX1的泛素化和降解。發(fā)現(xiàn)添加MG132可以消除TRIM56過度表達(dá)導(dǎo)致的YBX1表達(dá)下降,而該處理對(duì)Ybx1 mRNA水平?jīng)]有影響(圖3a-b)。CHX用于抑制細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成,在該條件下,發(fā)現(xiàn)TRIM56的過表達(dá)明顯縮短YBX1的半衰期,而沉默TRIM56則明顯延長(zhǎng)YBX1的半衰期(圖3c-f)。


第二步,TRIM56促進(jìn)YBX1的泛素化降解

Co-IP分析顯示,TRIM56過表達(dá)后,YBX1的泛素化水平明顯增加,而YBX1的表達(dá)則明顯降低(圖3g-h)。分別構(gòu)建TRIM56 WT、突變體,進(jìn)行Co-IP實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)TRIM56的過表達(dá)明顯促進(jìn)YBX1的泛素化和降解,但C21/24A突變體TRIM56沒有這種效果(圖3i-k)。此外,當(dāng)過表達(dá)C21/24A突變體時(shí),不會(huì)發(fā)生因TRIM56過表達(dá)導(dǎo)致的YBX1半衰期縮短(圖3l)。結(jié)果表明TRIM56直接泛素化YBX1,以促進(jìn)其蛋白酶體降解。

3 TRIM56促進(jìn)YBX1的泛素化和降解(Ref. Fig 5)


結(jié)論:該研究利用蛋白質(zhì)組發(fā)現(xiàn)SCI后神經(jīng)元中的YBX1表達(dá)明顯增加。功能上,YBX1敲除促進(jìn)脊髓損傷后的功能恢復(fù)。機(jī)制上,TRIM56與YBX1結(jié)合并促進(jìn)其泛素化,從而加速其降解,導(dǎo)致YBX1保護(hù)Zbp1 mRNA穩(wěn)定性降低、表達(dá)下降,從而抑制ZBP1介導(dǎo)的PANoptosis,進(jìn)而抑制脊髓損傷。為SCI的LIAO 策略提供了新的見解。

 


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