南通泌尿疾病動(dòng)物模型建模

    pirb在軸突生長錐表達(dá)，位于富含肌動(dòng)蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經(jīng)元突起的表達(dá)呈點(diǎn)狀分布。文獻(xiàn)表明，pirb表達(dá)隨年齡增加，特別是在老齡認(rèn)知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時(shí)程增強(qiáng)的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉(zhuǎn)基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導(dǎo)幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應(yīng)。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號(hào)通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細(xì)胞和動(dòng)物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點(diǎn)，為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機(jī)制提供了很好的工具。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型?？梢院喕瘜?shí)驗(yàn)操作和樣品收集。南通泌尿疾病動(dòng)物模型建模

    l型棒10的第二端12露在椎間孔外，有利于調(diào)整插入位置。***端11的長度大于等于第二端12的長度。在本實(shí)施例中l(wèi)型棒的材料選擇的是h62黃銅。在另外的實(shí)施例中其材料可以是聚乳酸等其他材料，甚至可以用1個(gè)u型棒來代替2根l型棒插入腰4椎間孔和腰5椎間孔。u型棒的兩臂均為4mm長。手術(shù)成功標(biāo)志為：當(dāng)l型棒或u型棒正確插入，壓迫到背根神經(jīng)節(jié)時(shí)，手術(shù)側(cè)的后肢肌肉呈現(xiàn)輕微的暫時(shí)性抽搐，且不引起鼠尾擺動(dòng)。需要根據(jù)大鼠體重選擇l型棒或u型棒的直徑大?。寒?dāng)大鼠體重在200g到不足220g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在220g到不足250g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在250g到不足300g范圍時(shí)，采用直徑為；當(dāng)大鼠體重在300g到350g范圍時(shí)，采用直徑為。實(shí)施例2、模型的效果檢測本發(fā)明已通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該模型的效果。通過28天的觀察，確定了實(shí)施例1獲得的模型穩(wěn)定且準(zhǔn)確的模擬了腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)根后的跛行以及疼痛癥狀。圖3顯示了術(shù)后大鼠出現(xiàn)手術(shù)側(cè)(左側(cè))后爪(見a部所示)沒有同其他三只爪一起抓握網(wǎng)架，而是蜷縮著，呈現(xiàn)不敢承重的表現(xiàn)。表1大鼠術(shù)后不同天數(shù)縮足閾值(單位：g)表1顯示了術(shù)后28天內(nèi)11只大鼠雙下肢縮足閾值的具體的均值和標(biāo)準(zhǔn)誤。常州大鼠疾病動(dòng)物模型建模什么是疾病動(dòng)物模型建模？

    引起組織壞死，從而導(dǎo)致卵巢功能早衰。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法。本發(fā)明根據(jù)“順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡，引起組織壞死，從而導(dǎo)致卵巢功能早衰”這一原理，使用不同濃度及不同方法建立了化療性損傷卵巢早衰動(dòng)物模型，并對比各種方法間的優(yōu)劣性，篩選出順鉑比較好的濃度及給藥時(shí)間，為篩選順鉑導(dǎo)致的卵巢早衰動(dòng)物模型比較好劑量提供了一種操作簡單，成功率高，結(jié)果可靠的實(shí)驗(yàn)方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法：將劑量為按體重一日2～3mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：連續(xù)施用7天，末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型。或：將劑量為按體重4～6mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：第1天、第8天施用；末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型。進(jìn)一步地，可將順鉑溶于％氯化鈉溶液配置成順鉑注射液，然后注射。所述順鉑，可市場常規(guī)購買得到，比如齊魯制藥公司生產(chǎn)的順鉑。進(jìn)一步地，注射期間每天稱量大鼠體重，注射后每周稱量2次；末次注射后15天，麻醉取血檢測***水平，取卵巢檢測對比卵巢重量。

    即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點(diǎn)還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動(dòng)物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗(yàn)證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。通過pirb敲入動(dòng)物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點(diǎn)的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗(yàn)證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的結(jié)果圖。很多自發(fā)性動(dòng)物模型在研究人類疾病時(shí)具有重要的價(jià)值。

1、動(dòng)物模型名稱：FSH聯(lián)合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬：KM小鼠或NIH小鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別：雌性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡：3~4周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重：16~18g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境：SPF級 1、實(shí)驗(yàn)方法：注射用重組人促卵泡***（FSH）聯(lián)合注射絨促性素（HCG）誘導(dǎo)。對雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG當(dāng)天下午約16：00~17：00按雌雄鼠1：1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：合籠后次日雌鼠檢查出現(xiàn)陰栓，表明成功構(gòu)建了超排懷孕小鼠模型。必須真正了解研究者感興趣且需要的小鼠疾病模型。青浦區(qū)疾病動(dòng)物模型建模供應(yīng)商

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    配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)驗(yàn)建立大鼠卵巢早衰模型1.實(shí)驗(yàn)儀器及材料：如表1所示。表12.實(shí)驗(yàn)方法：①動(dòng)物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，體重180-220g。普通環(huán)境飼養(yǎng)，滅菌飼料飼養(yǎng)，自由飲水。②分組及給藥劑量：如表2所示。表2③給藥途徑及頻率：腹腔注射；2mg、3mg組連續(xù)注射7天；4mg、6mg組***天、第八天注射；對照組連續(xù)7天注射生理鹽水。④病理檢測：末次注射后15天，動(dòng)物麻醉，采集血液，分離血清，elisa法測定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動(dòng)物，取卵巢組織稱重，對大鼠的卵巢組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。注射期間每天稱重，給藥后每周稱重兩次，每天進(jìn)行陰道涂片檢測動(dòng)情周期。3.統(tǒng)計(jì)方法：采用graphpad進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量資料均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異，p＜。4.試驗(yàn)結(jié)果：(3mg組注射完成后*存活一只，不進(jìn)行統(tǒng)計(jì))如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示：①***水平：與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低，但是只有2mg組有明顯降低(p＜)，如圖1所示；與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖2所示；與空白組相比。南通泌尿疾病動(dòng)物模型建模

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