嘉定區(qū)品質好的疾病動物模型建模

葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結腸炎小鼠模型：1、動物模型名稱：葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結腸炎小鼠模型2、實驗動物種屬：BALB/c小鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年鼠5、實驗動物體重：18g-22g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：實驗前小鼠禁食不禁水24h，24小時后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠端的大便。小鼠自由飲用5%葡聚糖硫酸鈉（DSS）溶液，連續(xù)14天。進行疾病活動指數(shù)(DAI)的評估、取結腸進行組織病理學檢查。2、檢測標準：DAI評分明顯升高，與對照組比較具統(tǒng)計學意義。結腸病理鏡檢可見結腸炎癥、病變深度、隱窩破壞、潰瘍病變明確研究疾病的獨特資源確定小鼠疾病模型的初步選擇。嘉定區(qū)品質好的疾病動物模型建模

1、動物模型名稱：FSH聯(lián)合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實驗動物種屬：KM小鼠或NIH小鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：3~4周齡5、實驗動物體重：16~18g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：注射用重組人促卵泡***（FSH）聯(lián)合注射絨促性素（HCG）誘導。對雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG當天下午約16：00~17：00按雌雄鼠1：1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標準：合籠后次日雌鼠檢查出現(xiàn)陰栓，表明成功構建了超排懷孕小鼠模型。虹口區(qū)疾病動物模型建模原理臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。

    步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內，產出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中grna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴增產物測序，鑒定是否為嵌合體。本發(fā)明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對應的擴增產物大小為，primers2對應的擴增產物為。用于f0代小鼠測序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。

1、動物模型名稱：淚腺摘除聯(lián)合新潔爾滅致干眼兔模型2、實驗動物種屬：新西蘭兔3、實驗動物性別：雌雄不限4、實驗動物年齡：2~3月齡5、實驗動物體重：1.8~2.5kg6、實驗動物環(huán)境：SPF級，1、實驗方法：摘除淚腺聯(lián)合新潔爾滅誘導。兔耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉聯(lián)合肌肉注射進速眠新Ⅱ進行麻醉。麻醉后，進行淚腺摘除手術，眼瞼局部以75％酒精消毒，鋪洞巾，于眼下眶周部做一切口，小心分離皮膚、肌肉、筋膜，尋找到淚腺后完整摘除之，然后縫合創(chuàng)口。術畢，滴妥布霉素**眼液2滴、涂四環(huán)素可的松眼藥膏，共7d。術后兔創(chuàng)口愈合后進行給藥造模。眼滴0.1%新潔爾滅溶液，2次/天，2滴/次，連續(xù)用藥14d。2、檢測標準：SchirmerI試驗淚液分泌減少，1%虎紅角膜染色試驗虎紅著色評分值高，角膜出現(xiàn)病理改變。避免了在人身上進行實驗所帶來的風險。

    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現(xiàn)在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個。哪里可以做動物模型？黃浦區(qū)哪家公司提供疾病動物模型建模

這類動物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。嘉定區(qū)品質好的疾病動物模型建模

    技術領域：本發(fā)明屬于遺傳學和生物技術領域，具體涉及pirb基因敲入的小鼠動物模型，還涉及上述小鼠動物模型的構建方法。背景技術：鼠源成對免疫球蛋白樣受體b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人類免疫球蛋白樣受體b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7號染色體近端，總大小為，編碼841個氨基酸，目前鑒定出15個外顯子，外顯子1起始密碼為atg，外顯子15的終止密碼子是tga(轉錄本：)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白，包含由六個免疫球蛋白樣結構域(domain，d)組成(d1-d6)的胞外段，一個疏水的跨膜段，三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一個itims樣序列組成的胞內段。理論上講，pirb的分子量約為92kd，但是western-blot分析中，pirb經常位于105kd處，因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn)，pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中，pirb在許多造血細胞都有表達，包括b細胞、肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞和樹突細胞，但是在胸腺細胞、成熟的t細胞和自然殺傷細胞不表達。嘉定區(qū)品質好的疾病動物模型建模

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