常州肺病疾病動物模型建模

麻醉小鼠，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管，將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力，則注入博萊霉素5mg/kg/L（對照組注入等量的生理鹽水）。手術(shù)完畢后迅速將動物直立、旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布均勻，動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。4.2模型鑒定及后續(xù)檢測：肺纖維化模型發(fā)展時間：給藥后第7天肺組織大多呈重度肺泡炎改變，肺泡腔及肺間質(zhì)內(nèi)有大量中性粒細胞浸潤，部分肺泡腔破壞或消失，肺間隔內(nèi)成纖維細胞和增生，與正常肺組織對比差別明顯；給藥后第14天，肺纖維化開始形成。巨噬細胞、中性粒細胞等炎性細胞明顯減少，成纖維細胞增多，肺泡間隔明顯增厚，有膠原沉積。給藥后第28天，多數(shù)小鼠發(fā)生彌漫性肺間質(zhì)纖維化，肺間質(zhì)被膠原纖維和成纖維細胞替代，肺泡壁破壞，肺大泡形成，但仍可見炎性細胞浸潤。疾病動物模型建模好做嗎？常州肺病疾病動物模型建模

技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明屬于遺傳學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及pirb基因敲入的小鼠動物模型，還涉及上述小鼠動物模型的構(gòu)建方法。背景技術(shù)：鼠源成對免疫球蛋白樣受體b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人類免疫球蛋白樣受體b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7號染色體近端，總大小為，編碼841個氨基酸，目前鑒定出15個外顯子，外顯子1起始密碼為atg，外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本：)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白，包含由六個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain，d)組成(d1-d6)的胞外段，一個疏水的跨膜段，三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一個itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講，pirb的分子量約為92kd，但是western-blot分析中，pirb經(jīng)常位于105kd處，因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn)，pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中，pirb在許多造血細胞都有表達，包括b細胞、肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞和樹突細胞，但是在胸腺細胞、成熟的t細胞和自然殺傷細胞不表達。揚州酒精肝疾病動物模型建模查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻。

可以克服人類某些疾病潛伏期長，病程長和發(fā)病率低的缺點一般遺傳性、免疫性、代謝性和內(nèi)分泌等疾病在臨床上發(fā)病率很低，例如急性白血病的發(fā)病率較降，研究人員可以有意識地提高其在動物種群的中發(fā)生頻率，從而推進研究。同樣的途徑已成功地應(yīng)用于其他疾病的研究，如血友病、周期性中性白細胞減少癥和自身免疫介導(dǎo)性疾病等。臨床上某些疾病潛伏期很長，很難進行研究，、慢性氣管炎、肺心病、等疾病，這些疾病發(fā)展很緩慢，有的可能要幾年、十幾年、甚至幾十年。有些致病因素需要隔代或者幾代才能顯示出來，人類的壽命期相對來說是很長的，但一個科學(xué)家很難有幸進行三代以上的觀察，而許多動物由于生命的周期很短，在實驗室觀察幾十代是容易的，如果使用微生物甚至可以觀察幾百代。

SPF級SD雄性大鼠，體重約200～220g。使用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)建立急性肺損傷模型。將大鼠放入固定盒中，用酒精檫拭大鼠尾靜脈后，按壓住尾靜脈1/3處，注射器進針后回抽有血后注入LPS溶液（溶于生理鹽水，給藥劑量10mg/kg），從而建立內(nèi)性急性肺損傷大鼠模型。對照組的大鼠尾靜脈注射等體積的生理鹽水。5.2模型鑒定及后續(xù)檢測：5.2.1肺損傷后的目視觀察：如下圖所示，在急性肺損傷模型小鼠中，肺部有多處明顯滲血，后有肉眼可見肺部大面積出血滲出，可以直觀的反映肺損傷程度。歡迎致電咨詢疾病動物模型建模。

機械通氣致肺損傷模型實驗動物：兔子、大鼠獲得方式：使用呼吸機，予以特定的通氣模式（例如：大鼠接受20mL/Kg的潮氣量、85次/min的呼吸頻率2h）模型特點：急性肺損傷病理特征之一的透明膜常出現(xiàn)于大型的實驗動物模型，而在大鼠或小鼠中很少出現(xiàn)，因此進行機械通氣致肺損傷造模動物的選擇需要謹慎。2.吸入性急性肺損傷模型實驗動物：小鼠、大鼠、兔子造模試劑：煙霧、空氣污染物及有害氣體、脂多糖、活菌獲得方式：通過吸入、氣管內(nèi)滴入或靜脈滴注脂多糖、活菌、煙霧、有害化學(xué)試劑及氣體等導(dǎo)致肺很多自發(fā)性動物模型在研究人類疾病時具有重要的價值。普陀區(qū)疾病動物模型建模

小鼠疾病模型有助于遺傳性疾病致病基因的發(fā)現(xiàn)與驗證。常州肺病疾病動物模型建模

即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機制。通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的結(jié)果圖。常州肺病疾病動物模型建模

上海東寰生物科技有限公司目前已成為一家集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售相結(jié)合的服務(wù)型企業(yè)。公司成立于2015-09-24，自成立以來一直秉承自我研發(fā)與技術(shù)引進相結(jié)合的科技發(fā)展戰(zhàn)略。公司主要產(chǎn)品有原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型等，公司工程技術(shù)人員、行政管理人員、產(chǎn)品制造及售后服務(wù)人員均有多年行業(yè)經(jīng)驗。并與上下游企業(yè)保持密切的合作關(guān)系。東寰生物集中了一批經(jīng)驗豐富的技術(shù)及管理專業(yè)人才，能為客戶提供良好的售前、售中及售后服務(wù)，并能根據(jù)用戶需求，定制產(chǎn)品和配套整體解決方案。上海東寰生物科技有限公司以先進工藝為基礎(chǔ)、以產(chǎn)品質(zhì)量為根本、以技術(shù)創(chuàng)新為動力，開發(fā)并推出多項具有競爭力的原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型產(chǎn)品，確保了在原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型市場的優(yōu)勢。