ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。然而,影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。Elisa試劑盒的優(yōu)化操作需要根據(jù)實際就行技術(shù)表現(xiàn),例如加樣量、孵育時間、溫度等。海門表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。常州白介素8(IL8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Elisa試劑盒的選擇需要綜合考慮其性能、品質(zhì)、價格以及適應(yīng)性,以確保優(yōu)化的選擇。
固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的很適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值比較大而蛋白量很少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEVIgM抗體,這些抗體就會與HEV的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與一次孵育結(jié)合上的HEVIgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEVIgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并且在波長:450nm處測量O.D.值,按照本HEVIgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn),O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。Elisa試劑盒的優(yōu)化操作需要參考各種參數(shù)的特性,如抗原、抗體、加樣,等等。
分子生物學(xué)與免疫學(xué)的發(fā)展是有目共睹的,還記得2003年的非典嗎?不用說防治,就是確診都很困難。到現(xiàn)在,過去10來年,什么禽流感、豬流感,什么埃博拉、中東呼吸綜合征,出現(xiàn)幾天,抓住它的基因序列,獲取蛋白和抗體就不是難事,研制疫苗與抗體血清也有可能,拿出檢測試劑盒只是探囊取物。公司近七千種檢測試劑盒主要是ELISA試劑盒,也有少部分是CLIA試劑盒,有雙抗夾心法與競爭抑制法之分。特色產(chǎn)品有檢測靈敏度高的高敏型檢測試劑盒;實驗耗時短,試劑使用方便的快捷型檢測試劑盒;以及只需要少量標(biāo)本即可檢測的小樣本檢測試劑盒;用于檢測抗體的測抗體檢測試劑盒;用于檢測小分子物質(zhì)的通用型泛物種檢測試劑盒;用于檢測二個物種以上靶蛋白的多物種檢測試劑盒。這些試劑盒目前基本上都只能用于科學(xué)研究,不用于臨床診斷,云克隆診斷試劑研究所正在著手逐步將部分指標(biāo)轉(zhuǎn)化為臨床用體外診斷試劑。杭州昊鑫生物是云克隆浙江省一級代理,大量產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,歡迎咨詢!Elisa試劑盒的優(yōu)點包括敏感性高、特異性強(qiáng)、結(jié)果可靠等。海門基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
完整的ELISA試劑盒包含酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物)。海門表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
為比較不同固相在某一elisa試劑盒測定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗:用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的elisa試劑盒操作步驟進(jìn)行測定,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別比較大,這種載體就是這一elisa試劑盒測定項目的較為合適的固相載體。在elisa試劑盒中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積多多增加。elisa試劑盒板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近elisa試劑盒板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點的暴露面處于較為佳反應(yīng)狀態(tài),因此珠式elisa試劑盒的反應(yīng)往往更為靈敏。海門表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
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