體外培養(yǎng)環(huán)境中,細(xì)胞自身沒有抗污染的能力,即使培養(yǎng)基會(huì)添加抗 生素,抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細(xì)菌、真 菌、支原體和病毒等,其中又以支原體污染蕞為普遍棘手。一旦污染了支原體的細(xì)胞將無法正常形成單克隆,而且細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程容易死亡,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)效率極低。為了維持實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定,必須對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)使用到的細(xì)胞進(jìn)行支原體檢測(cè)。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒,利用qPCR的原理進(jìn)行支原體檢測(cè),試劑盒具備操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),是支原體檢測(cè)的優(yōu) 選方法。南京正揚(yáng)的支原體檢測(cè)試劑盒能提供性能驗(yàn)證報(bào)告嗎?鄭州便捷支原體檢測(cè)試劑盒
qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時(shí)需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個(gè)試劑組分混勻后按照說明書進(jìn)行配制并分裝。在實(shí)驗(yàn)室,注意分區(qū)操作,降低實(shí)驗(yàn)發(fā)生污染的風(fēng)險(xiǎn)。用qPCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么?①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象,該問題是由反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉,反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān),需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴(kuò)增曲線不平滑現(xiàn)象:可能與ROX加入量不足相關(guān),個(gè)別設(shè)備有ROX校正功能,不同型號(hào)設(shè)備對(duì)ROX的需求量會(huì)有差異,需設(shè)置實(shí)驗(yàn)摸索合適的ROX加入量。杭州支原體檢測(cè)中國(guó)藥典對(duì)支原體檢測(cè)的要求。
支原體污染后,細(xì)胞不會(huì)有明顯的死亡現(xiàn)象,且支原體通常能與細(xì)胞長(zhǎng)期共存,培養(yǎng)體系亦無渾濁現(xiàn)象,然而實(shí)際上卻可能存在細(xì)胞形變,DNA合成受抑制等諸多問題,并且即使發(fā)現(xiàn)支原體污染也較難徹底清理,因此確保細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)初期無支原體污染是至關(guān)重要的。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒,利用qPCR的原理進(jìn)行支原體檢測(cè),試劑盒具備操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),且符合中、美、日、歐國(guó)家要求,是支原體檢測(cè)的優(yōu) 選方法。
我國(guó)藥典規(guī)定的支原體檢測(cè)方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處,如所需時(shí)間較長(zhǎng),有的操作復(fù)雜等。《中國(guó)藥典2020年版3301支原體檢測(cè)法》中指出:除培養(yǎng)法和DNA染色法外,也可采用經(jīng)國(guó)家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法,對(duì)支原體進(jìn)行檢測(cè)。由于支原體檢測(cè)存在必要性,如何盡可能提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率以及效率尤為關(guān)鍵。不少業(yè)內(nèi)指導(dǎo)原則指出,支原體的核酸法檢測(cè),通過嚴(yán)格且充分的方法學(xué)驗(yàn)證,可以替代藥典中對(duì)的培養(yǎng)法與DNA染色法。細(xì)胞支原體污染用快速支原體檢測(cè)試劑盒。
南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒(磁珠法)和支原體DNA檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法),支原體DNA檢測(cè)試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測(cè)主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細(xì)胞中是否有支原體污染。試劑盒設(shè)置有內(nèi)參(IC),可對(duì)樣品提取至PCR擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)總流程進(jìn)行監(jiān)控,避免出現(xiàn)假陰性的情況。本試劑盒涵蓋120多種支原體DNA序列,操作便捷、檢測(cè)快速、專一性強(qiáng)、靈敏度高,可提供合規(guī)性能驗(yàn)證報(bào)告。南京有哪些公司做支原體檢測(cè)試劑盒?杭州支原體檢測(cè)
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)的重要性。鄭州便捷支原體檢測(cè)試劑盒
南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些?①操作簡(jiǎn)單:樣品操作十分簡(jiǎn)便,無需自配試劑,且樣品無需離心富集,節(jié)省大量時(shí)間;②樣品需求量少:只需500uL樣品進(jìn)行前處理即可,無需進(jìn)行樣品離心富集。③檢測(cè)用時(shí)較短:蕞快2h即可出結(jié)果,是CGT領(lǐng)域客戶的優(yōu) 選;④合規(guī)驗(yàn)證:整個(gè)檢測(cè)體系(包括提取和檢測(cè))由全球蕞大第三方實(shí)驗(yàn)室Eurofins權(quán) 威認(rèn)證,驗(yàn)證報(bào)告具備公正性、權(quán) 威性,符合中、美、日、歐申報(bào)要求;鄭州便捷支原體檢測(cè)試劑盒